浙科版选修1第一部分实验1：大肠杆菌的培养和分离共27张PPT.ppt

二、大肠杆菌 配置步骤 四、培养 * 实验1：大肠杆菌的培养和分离 扩 大 划线 一、无菌技术 1.无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。 1）无菌操作：各种器皿必需是无菌的 各种培养基必需是无菌的 接种时不能带入其他杂菌 　（１）消毒： 　　指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物。（不包括芽孢和孢子） 2.消毒与灭菌的概念及两者的区别 （2）灭菌： 以物理或化学方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体，芽孢等，而达到完全无菌的过程。 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。 1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min，如牛奶、啤酒、果酒、酱油等不宜进行高温灭菌的液体 3、化学药剂消毒法:用75%酒精进行皮肤、伤口、动植物组织表面消毒，空气、手术器械、塑料或玻璃器皿等;氯气消毒水源 4、紫外线消毒：如接种室空气 …… (3)消毒的方法： (4)常用灭菌的方法： 1、灼烧灭菌 2、干热灭菌：160-170 ℃下加热1-2h。 3、高压蒸汽灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-30min. 4、不能加热灭菌的化合物，如尿素（加热会分解）：G6玻璃砂漏斗过滤（G6孔径最小，细菌不能滤过） 1.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 液体培养基 固体培养基 凝固剂 琼脂 扩大培养，工业生产 分离纯化，鉴定菌种，计数，保藏 三 选择培养基——在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长，如 尿素固体培养基可以分离以尿素为氮源的微生物 不加氮源的无氮培养基：分离固氮菌 鉴别培养基——在培养基中加入某种指示剂或化学药品，用以鉴别不同种类的微生物，如 伊红—美蓝和大肠杆菌的代谢产物结合，使菌落呈深紫色，并带有金属光泽，可以用来鉴别大肠杆菌 称量 溶化 调PH 灭菌 倒平板 过程 五、分离 第一区域 第二区域 第三区域 第四区域 第五区域 在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 培养皿倒置：防止培养皿盖上的水滴落在培养基上，使培养基上的菌落随水扩散，达不到分离的目的。 平板划线时不能划破培养基的原因 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 课题2 分离以尿素为氮源的 微生物 课题的内容： 从土壤中分离出能利用尿素的细菌，观察菌落数，并了解它在生态平衡中的作用。 以LB全营养培养基为对照，观察全营养生长细菌的菌落数。 细菌中含有脲酶 参与N循环 实验原理： 脲即尿素，是蛋白质降解的产物。有一些细菌含有脲酶可以分解尿素，脲酶可将尿素分解为能被植物吸收的氨，利用尿素作为其生长的氮源（反应式） 中性 碱性 酚红颜色 黄色 红色 * * * * * *