第一章　基因工程第1节基因工程3.ppt

* 第一节 基因工程概述—— 转化受体细胞、筛选重组细胞、实现功能表达 学习目标 1．举例说明将目的基因导入受体细胞的方法 2．简述筛选和鉴定重组细胞的方法 3．简述基因工程的一般过程及不同转基因生物培育方法的特殊性 问题1：将目的基因导入受体细胞的方法有哪些？请举例说明。 问题2：如何筛选和鉴定出真正获得目的基因并能有效表达的受体细胞呢？ 问题3：β-珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分。当它的成分异常时，动物有可能患某种疾病，如镰刀形细胞贫血症。假如让你用基因工程的方法，使大肠杆菌生产出鼠的β-珠蛋白，想一想，应如何进行设计？ 转化受体细胞 1.阅读教材中将目的基因导入植物细胞的相关内容，思考回答下列问题： （1）将目的基因导入植物细胞常采用的方法是什么？ （2）说说农杆菌有何特点？ （3）农杆菌转化法的过程是怎样的？ （4）我国的转基因抗虫棉是用什么转化方法获得的？这种方法有什么优点？ 2．早期基因工程都用原核生物作受体细胞，这是为什么？ 3．目的基因导入大肠杆菌细胞最常用的转化方法是怎样的？ 1.（1）将目的基因导入植物细胞常采用的方法是什么？ （2）说说农杆菌有何特点？ （3）农杆菌转化法的过程是怎样的？ （4）我国的转基因抗虫棉是用什么转化方法获得的？这种方法有什么优点？ 农杆菌介导转化法。 农杆菌生活在土壤中，自然条件下能感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤或发状根；农杆菌中Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞染色体DNA上。 农杆菌介导转化法的过程是将目的基因导入Ti质粒→转入农杆菌→含重组Ti质粒的农杆菌→导入植物细胞→将基因插入染色体的DNA中→植物组织培养→转基因植物。 花粉管通道技术。简便经济。 2．早期基因工程都用原核生物作受体细胞，这是为什么？ 3．目的基因导入大肠杆菌细胞最常用的转化方法是怎样的？ 原核生物具有一些其他生物没有的特点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少等。 首先用钙离子处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态（本质上是使细胞壁的通透性增加），这种细胞成为感受态细胞。第二步是将重组表达载体DNA分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子（即提高基因的导入率），完成转化过程。 导入 方法 导入植物细胞 导入动物细胞—— 导入微生物细胞—— 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注射法 感受态细胞吸收DNA分子 【例1】根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理，你能分析出农杆菌不能将目的基因导入单子叶植物的原因吗？ 通常单子叶植物的细胞壁中不能合成酚类诱导物如乙酰丁香酮和羧基乙酰丁香酮等，这使得单子叶植物不易被农杆菌侵染。 筛选重组细胞 1．结合大肠杆菌pBR322质粒的事例，说说利用插入灭活法筛选并鉴定重组细胞的原理是什么？ 2．用什么方法可以知道抗虫棉被赋予了抗虫特性？ 筛选重组细胞 ①插入灭活法 ②核酸杂交法——核酸水平 ③免疫化学检测法——蛋白质水平 ④个体水平 插入灭活法 ①外源DNA未插入pBR322质粒tetr基因的编码序列内的载体导入受体细胞； ②外源DNA插入pBR322质粒tetr基因的编码序列内，使该基因失活成tets的载体导入受体细胞 ③体外重组反应的混合物涂布在含有氨苄青霉素的琼脂平板上，凡获得了pBR322质粒和重组质粒的宿主细胞都可长成菌落； ④将含有氨苄青霉素的琼脂平板上的菌落原位影印在含有四环素的琼脂平板上，使其生长； ⑤对比这两个平板上菌落的生长情况，凡在含有氨苄青霉素的琼脂平板上能够生长而在含有四环素的琼脂平板上不能生长的菌落，就是带有重组体质粒的菌落。 （1）给棉铃虫喂食抗虫棉，看虫子生活状况； （2）检测抗虫棉染色体DNA上是否插入目的基因。具体做法是 ①首先取出转基因生物的基因组DNA ②用含目的基因的DNA片段用放射性同位素等作标记,以此做探针 ③使探针和转基因生物的基因组杂交,若显示出杂交带,表明染色体已插入染色体DNA中 用什么方法可以知道抗虫棉被赋予了抗虫特性？ 【例2】（3）在做抗虫棉试验时，已经检测出棉的植株中含有抗虫基因，但让棉铃虫食用棉的叶片时，棉铃虫并没有被杀死，这说明 。 为此，科学家对棉植株中的抗虫基因进行了修饰，结果食用了棉叶的棉铃虫中毒死亡了，从变异类型分析，这种对抗虫基因的修饰属于 。 抗虫棉在棉植株里没有表达 基因突变 【例2】下图表示利用基因工程培育抗虫棉过程的示意图。请据图回答下列有关问题： （1）分离[①]操作所用目的基因主要有两条途径：一条是