三细菌的革兰氏染色及芽孢染色法.pptVIP

江苏省句容中等专业学校 * 细菌的革兰氏染色法 * 知识回顾 1.什么是微生物？ 2.细菌简单染色及其操作步骤？ 细菌的革兰氏染色法 * 引导探索 细菌的革兰氏染色法 * 1. 革兰氏染色的基本原理 2.革兰氏染色所需要的材料和器材 3.革兰氏染色的操作方法及步骤 4.革兰氏染色结果分析 5. 小结 学习内容 细菌的革兰氏染色法 * 1.能够说出革兰氏染色的基本原理。 2.能够描述出革兰氏染色法的操作步骤及注意事项。 3. 能够熟练规范的对细菌进行革兰氏染色。 通过本节课学习，学生能够达到以下目标： 学习目标 细菌的革兰氏染色法 * 1.革兰氏染色法 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。细菌先经碱性染料结晶紫染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，复染后可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。 染色的基本原理 细菌的革兰氏染色法 初染 媒染 脱色 复染 * 2.革兰氏阳性和阴性菌细胞壁成分比较 染色的基本原理 细菌的革兰氏染色法 肽聚糖 * 1.材料 培养12-16h枯草杆菌（Bacillus subtilis） 培养16h大肠杆菌（Escherichia coli） 2.染色液和试剂 草酸铵结晶紫、碘液、95%乙醇、蕃红、二甲苯、香柏油 3.器材 载玻片、接种环、酒精灯、废液缸、洗瓶、擦镜纸、显微镜等 需要的材料及器材 细菌的革兰氏染色法 * 涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脱色→水洗→ 复染→水洗→干燥→观察 实验步骤 细菌的革兰氏染色法 * 实验方法及步骤-涂片、干燥、固定 菌悬液 涂片 干燥 滴加无菌水 固定 取菌苔 涂片 固定的目的： 1.使细胞质凝固，以固定细胞形态； 2.并使菌体牢固地附着在载玻片上。 细菌的革兰氏染色法 * 革兰氏染色步骤-染色 碘液媒染1min 脱色20~30s 草酸铵结晶紫染色1-2min 媒染目的是提高染料和菌体细胞的结合程度，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物 脱色后使革兰氏阴性菌变为无色 细菌的革兰氏染色法 * 蕃红复染 1~2min 复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，从而将细胞区分成G+和G-两大类群 革兰氏染色步骤-复染 细菌的革兰氏染色法 * 紫色－－革兰阳性菌 红色－－革兰阴性菌 革兰染色结果 细菌的革兰氏染色法 * 思考讨论：细菌革兰氏染色的意义？ 1.鉴别细菌 2.选择药物 3.与致病性有关 * 1.本实验获得成功的关键？ 1）革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。 如脱色过度，会染成阴性菌；如脱色时间过短，染成假阳性菌。 2）在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀。 3）固定时烘烤要适度，太轻会冲走细菌，过度会破坏细菌形态。 4）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。 5）选用幼龄的细菌。 2.革兰氏染色会迅速将细菌分为革兰氏阳性和阴性，是很重要的染色方法。 小结 细菌的革兰氏染色法 * 课堂检测 1.细菌革兰氏染色的步骤包括：涂片、____ 、 ____ 、 ____ 、 ____ 、 ____ 、 ____ 和镜检。 2.革兰氏阳性菌呈 __ 色，革兰氏阴性菌呈红色。 3.细菌染色多采用 __ 染料 4.革兰氏染色的关键步骤是（　） A 脱色　　　B 媒染　　　　C 复染　　　　D 固定 5.当对未知菌进行革兰氏染色时，如何保证操作正确及结果可靠？ 细菌的革兰氏染色法 作业： 1.简述革兰氏染色的原理。 2.为什么说酒精脱色是革兰氏染色的关键步骤？ 江苏省句容中等专业学校