玉米大斑病菌钙调磷酸酶b亚基基因的克隆与功能分析-植物学专业论文.docx

缩写词表CaNCalcineurin钙调磷酸酶CnACalcineurin A Subnit钙调磷酸酶A亚基CnBCalcineurin B Subnit钙调磷酸酶B亚基 CTABCetyl Trimethy Ammonium Bromide十六烷基三甲基溴化铵 ddH20双蒸水dNTPDeoxynucleotide Triphosphates脱氧核苷三磷酸EBEnlidium Bromide溴化乙锭 EDTAEthylenediamine Tetraacetic Acid乙二胺四乙酸 PCRPolymerase Chain Reaction聚合酶链式反应RACERapid amplification of cDNA endscDNA末端快速扩增rpmRevolutions per minute每分钟转数IrisTris(Hydroxymethyl)Aminomethane三(羟甲基)氨基甲烷独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究 成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑兰垦盛些盘堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文 中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：吾7彩扔签字日期：硼年占月尸日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑兰垦盔些盘堂有关保留、使用学位论文的规定， 有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借 阅。本人授权亟皇垦盔些盘鲎可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行 检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：旁』j刍锄新虢舜拿史N签字日期：硼年多月9日签字日期：弘D矿年石月7 El学位论文作者毕业后去向：工作单位：电话：通讯地址：邮编：玉米大斑病菌钙调磷酸酶B亚基基因的克隆与功能分析1引言玉米大斑病是威胁玉米生产的一种重要真菌病害，在世界各主要玉米产区均造成 过重大经济损失【堙J。玉米大斑病菌的致病过程是病菌与寄主相互识别、相互作用的 过程，包括：分生孢子萌发形成附着胞，附着胞四周沉积黑色素靠强大的机械压力穿 透玉米表皮细胞，进入叶肉组织完成定殖过程。随后菌丝会在叶肉内不断扩展，并释放致病毒素，造成玉米叶肉细胞死亡。形成病斑LH。上述过程的完成涉及病菌中一系列信号传递及致病相关基因的表达。大量研究表 明，植物病原真菌的生长、发育和致病性均受到真菌的细胞外信号转导途径调控【6】， 目前发现的植物病原真菌信号转导途径主要有3类：Ca2+途径、cAMP途径和MAPK 途径，其中对MAPK(促分裂原活化蛋白激酶，Mitogen．Activated Protein Kinase)信 号转导途径和cAMP途径已有了比较深入的研究[7。t3J，而对ca2+途径的研究则相对滞 后。1998年，Hyde等发现了真菌中的Ca2+途径与细胞的极性生长及分化密切相关，由 此推测C矛+途径与病原微生物的致病性有着密不可分的关系【141。近年的研究表明ci2+ 途径对桃褐腐病菌(Monilinia fructicola)、水稻胡麻斑菌(CD幽加幻lus miyabeanus) 附着胞的形成及致病性具有重要的调控作用【15---20]。ca2+途径的主要组成部分包括：膜 上受体、异源三聚体G蛋白、磷脂酶C(Phospholipase C，PLC)、钙调素(CAM)等。 异源三聚体G蛋白是一类在真核生物中高度保守的蛋白，通过与下游不同的效 应分子偶联调控多种不同的信号转导途径，包括MAPK途径、eAMP途径和ca2+途 径【2Il。在真菌中，同样发现了异源三聚体G蛋白的存在及对这三种信号转导途径的 调控作用。G蛋白分别通过活化或抑制这些信号转导途径最终影响真菌的交配、细胞 分化、有丝分裂、致病性、分生孢子形成及萌发、色素合成、毒素的产生以及侵染过程等122_24]。PLC是Ca2+途径中的第二个关键构件。迄今为止，对于动物PLC的研究较为深入， 根据PLC的酶学动力学特征以及氨基酸序列的相似性将其分为三种类型，即p、丫、6， 每一种类型的PLC又可分为多种不同的亚型，在哺乳动物中已发现了至少lO种亚型的 PLC。植物PLC贝：J被分为三个类群：水解磷脂酰肌醇的肌醇磷脂依赖型磷脂酶C (PI．PLC)、非特异的磷脂酶C(PtdCho．PLC或PC．PLC)、糖基磷脂酰肌醇依赖的磷 脂酶C(GPI．PLC)，其中PbPLC参与Ca2+途径【2引。而在丝状真菌中，人们对磷脂酶C 仍然知之甚少。Tani等利用其特异性抑制剂U．73122对该酶的生理功能进行了初步