人肝癌胰岛素样生长因子ⅱ基因启动子结构与功能研究-内科学专业论文.docx

暨 南 大 学 博 士 学 位 论 文摘 要，，为 此本 研 究 选 择 已 知一基 因 无 异 常 的一人 胎 肝 细 胞 系 作 为 正 常 对，，照 克 隆 该 基 因 的一启 动 子 片 段并 以此 为 基 础观 察 肝 癌 中一基 因 启、动 子 碱 基 序 列 有 无 改 变甲基 化 水 平 变 化 及 其 与 转 录 调 控 的 关 系检 测一，基 因 启 动 子 的 转 录 调 控 活 性分 析 启 动 子 的 调 节 元 件 及 其 与 转 录 因 子 的 相 互 作，用以 揭 示 肝 癌 中一基 因 各 启 动 子 活 性 改 变 的 可 能 机 制 及 其 与一过 表。达 的 关 系第 一 部 分人 工一基 因一启 动 子 克 隆及 序 列 分 析，目 的克 隆 人一基 因一启 动 子 并 进 行 序 列 分 析以 明 确 肝 癌 组 织，中 工 一基 因 启 动 子 碱 基 序 列 有 无 改 变 及 其 与 转 录 调 控 的 关 系为 后 续 研 究 奠。定 基 础，方 法根 据数 据 库 提 供 的 工 一基 因全 序 列 及 参 考 有 关 文 献应 用 巢 式技 术 扩 增 分 离一人 胎 肝 细 胞 系 正 常 对 照 及例 肝 癌 组 织 的，一基 因一启 动 子 片 段并 采 用将产 物 克 隆。入一载 体目 的片 段 和 阳 性 重 组 子 分 别 通 过 琼 脂 糖 凝 胶 电泳 及。直 接 测 序 鉴 定结 果①一细 胞 及例 肝 癌 组 织一启 动 子 目 的片 段 均 扩 增 成，、、、，功长 度 分 别 为及②例 肝 癌 组 织启 动，。子 片 段 的 碱 基 序 列 与一相 应 的序 列 完 全 相 同未 见 突 变缺 失 等 改 变，经 与数 据 库』相 比 较结 果 完 全 一 致、，结 论① 成 功 克 隆 了一基 因一启 动 子② 本 组 肝 癌 组 织 中，基 因 启 动 子序 列 稳 定未 见 突 变缺 失 等 改 变可 能 与一异 常 表 达。的 转 录 调 控 机 制 无 关第 二 部 分人 肝 癌一基 因启 动 子 甲基 化 研 究目 的探 讨 肝 癌 中一基 因启 动 子 甲 基 化 水 平 变 化 及 其 对 转 录 活暨 南 大 学 博 士 学 位 论 文摘 要。性 的 影 响、、、方 法 应 用尺 甲 基 化 分 析 法 及 半 定 量一分 别 检 测 肝 癌 细 胞 系即一和一例 肝 癌 组 织 及 配 对 的 癌 旁 肝 组 织例 正 常 成 人 肝 组。，织 中一基 因一启 动 子 的 甲基 化 及 其表 达 状 况、结 果① 正 常 成 人 肝 组肝 癌 组包 括个 肝 癌 细 胞 系下 同和 癌 旁肝 组、，启 动 子 的 甲 基 化 率 分 别 为和、，，启 动 子 的 甲基 化 率 分 别 为和启、、。动 子 的 甲 基 化 率 分 别 为和启 动 子 的 甲 基 化，率 分 别 为和肝 癌 组 和 癌 旁 肝 组启 动 子 的 甲 基 化 率，，明显 高 于 正 常 成 人 肝 组而和启 动 子 的 甲基 化 率 则 都 明 显 低 于正 常 成 人 肝 组启 动 子 的 甲 基 化 率 在组 间 无 显 著 性 差。、异② 正 常 成 人 肝 组肝 癌 组 和 癌 旁 肝 组的 表 达 量 分 别 为、，士士和士的 表 达 量 分 别 为、，士土和士的 表 达 量 分 别 为、，。士士和士的 表 达 量 分 别 为、，士士和士肝 癌 组 和 癌 旁 肝 组的 表 达，水 平 均 明 显 低 于 正 常 成 人 肝 组而和的 表 达 水 平 则 都 明显 高 于 正 常 成 人 肝 组的表 达 水 平 在组 间 无 显 著 性 差 异。、，结 论① 肝 癌 细 胞 系 和 肝 癌 组 织 中一基 因和启 动 子 常 发 生，‘甲 基 化 水 平 改 变即启 动 子 多 出 现 高 甲 基 化而和启 动 子 主 要 表 现 为甲 基 化 水 平 降低②一基 因调 控 区 的 这 种 异 常 甲基 化 可 能 与 肝 癌 中、启 动 子 失 活 和启 动 子 再 活 化 的 转 录 调 控 机 制 密 切 相 关③ 肝 癌 细 胞 系 和，肝 癌 组 织 中 工 一基 因启 动 子 甲 基 化 水 平 无 明 显 变 化可 能 与一过 表。达 无 关第 三 部 分人一基 因一启 动 子 结 构研 究目 的分 析 人一基 因一启 动 子 的 转 录 调 节 元 件 及 其 与 转 录 因 子 的暨 南 大 学 博 士 学 位 论 文摘 要，相 互 作 用以 了解 肝 癌 细 胞 中一基 因 各 启 动 子 活 性 改 变