铁蛋白在虾夷扇贝新品种―海大金贝‖高抗逆性中的作用及机理分析-海洋生物学专业论文.docx

优秀毕业论文 精品参考文献资料 铁蛋白在虾夷扇贝新品种―海大金贝‖高抗逆性中的作用及机 理研究 摘 要 1 “海大金贝”和普通虾夷扇贝的蛋白组学初步比较分析 与外界环境、病害生物和敌害生物相比，遗传结构是影响扇贝存活率的最根本 的因素。为了保证扇贝养殖业的持续健康发展，需改善和培育高抗逆性的扇贝。 近年来，分子标记辅助育种工作已被全面开展，对抗逆性分子标记的筛查也越来 越多。本文以富含类胡萝卜素且具高抗逆性的虾夷扇贝新品种―海大金贝‖为材 料，对其高抗性进行了分子机理的探索。本研究运用蛋白组学的方法对―海大金 贝‖和普通虾夷扇贝雄性性腺中的差异蛋白进行了分析比较，最终得到 7 个差异 蛋白点，即 proteasome subunit alpha type-1 (PS)，fructose-bisphosphate aldolase (FBA)，peroxisomal 3,2-trans-enoyl-CoA isomerase (PECI)，chaperonin containing TCP1 (CCT)，ferritin (FTN)，elongation factor 1-beta (EF1B) 和 β-tubulin (TUBB)。 同时，Real-time PCR 分析表明其中四个基因（PS, FBA, PECI and CCT）的 mRNA 表达含量及其蛋白的含量在两种虾夷扇贝中是一致的。分析表明：1）这些差异 基因参与了各种各样的生物过程，如脂类和糖类代谢过程、蛋白折叠和降解过程。 2）类胡萝卜素累积可能影响了 PPARs 代谢通路，而使上述基因的表达发生了变 化。3）铁蛋白 FTN 在先天免疫系统中的重要作用，可作为研究“海大金贝”高 抗逆性的重要候选基因。本研究为海洋软体动物类胡萝卜素累积的研究开启了崭 新的一页并奠定了一定的分子基础。 2 虾夷扇贝六种铁蛋白亚基的鉴定及特征分析 作为一种重要的铁离子储存蛋白，铁蛋白在维系胞内铁离子平衡和先天防御过 程中起着重要的作用。本研究中，成功克隆了 6 个虾夷扇贝铁蛋白亚基（PyFer1, PyFer2, PyFer3, PyFer4, PyFer5 和 PyFer6）的 cDNA 及 DNA 序列；其中，PyFer1、 PyFer2、PyFer3 和 PyFer4 均由 4 个外显子和 3 个内含子组成，PyFer5 由 7 个外 显子和 6 个内含子组成，PyFer6 则由 5 个外显子和 4 个内含子组成。在 PyFer4 和 PyFer6 第二个内含子区域，存在小卫星序列。除了 PyFer5 和 PyFer6 外，其 余 4 个虾夷扇贝铁蛋白 5’-UTR 区域都含有铁反应调控元件 IRE。与此同时，在 PyFer2、PyFer4 和 PyFer6 的 3’-UTR 区域分别存在 3、17 和 1 个 A+U mRNA 不 稳定原件（TATT 或 ATTTA）。6 种铁蛋白亚基 ORF 长度分别为 522、516、516、 519、687 和 663 bp，编码 173、171、171、172、228 和 220 个氨基酸。这些铁 蛋白均含有典型的铁蛋白结构特征，即 4 个长 α 螺旋，1 个短 α 螺旋，1 个长环。 生物信息学预测结果显示，PyFer1、PyFer2、PyFer3 和 PyFer4 不但含有铁氧化 酶作用中心（E Y E E H E Q），还含有铁水合作用位点（D E E），而 PyFer5 仅含 有铁氧化酶作用中心，PyFer6 并不含有完整的铁氧化酶作用中心。PyFer1、 PyFer2、PyFer3 和 PyFer4 理化性质较为相似，属于胞质型可溶蛋白；而 PyFer5 和 PyFer6 铁蛋白 N 端含有信号肽序列，属于分泌型可溶蛋白。定量 PCR 分析显 示，6 种铁蛋白亚基在虾夷扇贝 D 型幼虫期表达量均有显著的提升，在成体虾夷 扇贝外套膜和肝胰腺中的表达量较高。虾夷扇贝受铁或者鳗弧菌胁迫后，6 种铁 蛋白的表达量均有了显著的变化。重组蛋白（rPyFer1、rPyFer2、rPyFer3 和 rPyFer4）展示了明显的铁氧化酶和抑菌活性。细胞定位显示，铁蛋白广泛分布 在虾夷扇贝不同细胞类型中。以上结果表明这 6 种铁蛋白可能参与了虾夷扇贝多 个基础生理活动，如免疫应答、铁离子平衡和贝壳形成过程。 3 铁蛋白在“海大金贝”高抗逆性中的作用 作为一种重要的铁离子储存蛋白，铁蛋白参与了虾夷扇贝的免疫应答、铁离子 平衡和贝壳形成等多个基础生理活动过程。本实验以普通虾夷扇贝和―海大金贝‖ 为材料，对两者经过铁或鳗弧菌胁迫后 6 种铁蛋白的反应灵敏度进行了比较，发 现与普通虾夷扇贝相比，―海大金贝‖中的 6 种铁蛋白均表现出更