比色法测定生物试样中钙含量.pptVIP

1.钙在生物中的生理功能及其应用 2.实验原理简介 3实验方法及步骤 * 钙与磷酸一起存在于骨骼中，在无机质中它是生物中含量最多的。作为电解质和钾、钠一起分布在体液中，维持着各种重要的生理功能. 对于细胞渗透压的调节，钙具有使之减小的作用。另外在增加肌肉紧张性的肌肉收缩方面也起着重要作用。钙是使神经系统和肌肉兴奋的重要离子之一，另外，作为酶的活性化成份，它是起血液凝固和消化作用的重要成分。在内科领域中，对骨科、消化系统、循环系统、肾、内分泌、代谢、血液、神经等病患的病态生理起着重要的作用. 钙在生物中的生理功能及其应用 * 在体液中，钙在达到动态平衡的一定的狭窄范围里，浓度是一定的，此范围的微小变化，可作为诊断疾病的标准。如上所述，在体液、生物试样，特别是血清中，钙浓度的变化，在临床上有重要意义，所以它是临床检查上必须测定的元素。 * 真不可思议！ * 实验原理简介  钙与邻甲酚酞氨羧络合剂显色，从而测定生物试样中钙的含量。由于生物试样中含有镁，且也能与邻甲酚酞氨羧络合剂显色，故需加入8-羧基喹啉-5——磺酸作为镁的掩蔽剂，同时用巯基化合物，硫醚化合物、二硫醚化合物或这些化合物的混合物作为邻甲酚酞氨羧络合剂或8-羧基喹啉-5——磺酸的稳定剂.显色时加入柠檬酸或柠檬酸盐或他们的混合物，使工作曲线成为一条通过原点的直线。 * 保存期 发色溶液 立即比色 15天 30天 60天 含巯乙醇的溶液 0.300 0.300 0.300 0.300 不含含巯乙醇的溶液 0.300 0.360 0.414 0.571 试剂空白值（以水作参比的吸光度） * 标准工作曲线示例图 Ca的浓度 吸光度 未加缓冲溶液Ⅱ 加缓冲溶液Ⅱ * 实验方法及步骤  试剂的配制： （1）将6毫克邻甲酚酞氨羧络合剂、0.4克8-羧基喹啉-5—磺酸溶解在50毫升单乙醇胺水溶液中，用N-HCl调节pH=5.5，加蒸馏水稀释到100毫升。作为发色溶液 （2）将5.5克单乙醇胺和0.2克硼酸溶解于蒸馏水中，稀释到一百毫升作为缓冲溶液Ｉ。（pH=11.0） （3） 将0.1克柠檬酸（一水化合物）溶解于缓冲溶液1中，作为缓冲溶液2（pH=11.0）。 * 标准曲线的绘制：分别取该浓度为2.5 、5.0、7.5、10.0、15.0、20.0毫克每分升的标准溶液10毫升加入2.0毫升缓冲溶液2，加入1.0毫升发色溶液，摇匀后。放置5分钟，再570毫微米波长处对照试剂空白，测定吸光度。以纵轴为吸光度，横轴为钙浓度绘制工作曲线 血清钙的测定：取50微升血清，加入2.0毫升缓冲溶液，摇匀后，加入1.0毫升发色溶液，摇匀，在570毫微米波长处，对照试剂空白测定吸光度。由标准工作曲线求出血清中钙的浓度。 *