普洱茶毕业设计论文汇.doc

1、绪 论 研究的目的与意义 近年来，自由基与多种疾病的关系，已经越来越被重视，自由基生物医学的发展使得探寻高效低毒的自由基清除剂——天然抗氧化剂成为生物化学和医药学的研究重点。二十一世纪现代农业的一个重要内容也是寻求和利用农产品的新的生物活性物质，其中抗氧化性的研究至关重要。 茶叶为山茶科植物山茶的叶芽，我国用其作饮料已有数千年的历史，是世界三大饮料（茶、咖啡和可乐）之首。茶叶有保健和医疗作用，茶含有多种对人体健康有益的有机物和无机营养元素。茶叶中的抗氧化物质可以有效地清除氧自由基和脂肪类自由基，预防脂质过氧化，即有抑制肿瘤发生，延缓衰老等功能。其中具有药理作用的主要是茶多酚和茶多糖等，所以搞清楚茶叶中茶多酚和茶多糖的抗氧化情况，对我们选择饮用茶叶品种和加工开发茶叶都有重要意义。 茶叶的种类繁多，本文选择极有代表性的茶叶普洱,对它的抗氧化性物质进行有效提取，又通过多种自由基清除实验和还原能力的测定，研究了普洱茶的体外抗氧化活性，对揭示茶叶的保健作用机理提供重要的理论和应用基础。 1.2 研究的现状 1.2.1 茶多酚 茶多酚的化学成分和结构 茶多酚（Tea Polyphenols）是茶叶中多酚类物质的总称，包括黄烷醇类、花色苷类、黄酮类、黄酮醇类和酚酸类等。其中以黄烷醇类物质（儿茶素）最为重要。茶多酚又称茶鞣或茶单宁，是形成茶叶色香味的主要成份之一，也是茶叶中有保健功能的主要成份之一。其结构式为： 2.茶多酚的理化性质 (1)物理性质：茶多酚在常温下呈浅黄或浅绿色粉末，易溶于温水(40℃一80℃)和（3）1.设计正交实验方案，确定茶多糖和茶多酚提取的最佳浸提温度、浸提时间、溶剂用量及浸提次数。 2.比色法检测中茶多酚的含量 3.通过连苯三酚自氧化测定所得普洱茶茶多糖的抗氧化活性。 普洱茶：云南市售；2,2二苯代苦味酰基(DPPH·)：Sigma公司；福林酚试剂：Sigma公司；绿茶提取物：WAGO公司；邻二氮菲、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、碳酸钠、 硫酸亚铁、30%过氧化氢等均为国产分析纯；紫外可见分光光度计UV-2600型：上海尤尼柯仪器有限公司；电子天平423S型：Sart orius BT；冻干机Heto Lyolab 3000：Denmark；家用微波炉MediaMP 17C-KE：广东美的电器股份有限公司；旋转蒸发器：上海亚荣生化仪器厂。 1. 总多酚含量测定：取1mL样品液加到10mL比色管中，依次加入去离子水1mL、福林酚试液0.5mL、26.7%碳酸钠溶液1.5mL，然后用水定容至10mL，室温下反应2h，在760nm下测定其吸光度。按回归方程计算，回归方程C= 89.524A - 3.1977。相关系数R2= 0.9991，按式计算。 式中：P— — —总多酚类物质含量，g/100g； C— — —从回归方程计算得到样品中多酚类物质浓度，μg/mL； n— — —稀释倍数； V— — —浓缩液的体积，mL； W— — —投料量，g。 Behnken试验设计： 以水为提取液，选择液固比、提取时间、微波功率3个因子为研究对象，以茶多酚含量作为响应值设计Box2 Behnken试验。试验因素水平及编码见表1。试验辅助软件为 Design Expert ( versi on 7 . 1 . 3 Stat—Ease I nc . ,Minneapolis,MN. US A)。 3. 验证试验：按优化后得到的最佳条件进行大量提取，测定其总多酚含量。 4. 羟自由基(·OH)的清除作用：采用亚铁离子催化过氧化氢产生羟自由基(Font on反应)方法。取0.75 mmol/L邻二氮菲溶液1mL，PBS液2mL和蒸馏水1mL，充分混匀后，加0.75mmol/L硫酸亚铁1mL，混匀，加0.01%的过氧化氢1mL，于37℃保持60min，于536nm处测其吸光度，其值为AP。用30%的乙醇1mL代替1mL过氧化氢，测得吸光度为AB。用试样 1mL代替1mL蒸馏水，测得吸光度为AS。 5. DPPH·自由基的清除作用：参照文献[]，并作适当修正。准确称取2,2二苯代苦味酰基(DPPH·)标准品10mg，无水乙醇定容至250mL得浓度为0.04mg/mL溶液。取此溶液3mL，加入不同浓度样品溶液1mL，摇匀，室温放置30min，517nm处测吸光度Ai。同时测1mL溶剂与3mL DPPH· 混合后吸光度Ac，1mL样品液加3mL乙醇混合后吸光度Aj。 2.2.1 材料 普洱茶采自西双版纳勐海茶场所生产的甲级普洱茶，该普洱茶属于后发酵茶。 用单因素实验研究茶多糖(TSP)提取工艺条件，其基本工艺流程为原料10g→热水浸提(23次)→沉淀过滤，