茶尺蠖脂肪酶合成基因EoL2的克隆和组织表达特征.PDF

31(1)48-56 中国生物防治学报 Chinese Journal of Biological Control 2015 年 2 月 茶尺蠖脂肪酶合成基因EoL2 的克隆和组织表达特征 * * ** 杜 琴 ，辛肇军 ，杨子威，李喜旺，陈宗懋，孙晓玲 （中国农业科学院茶叶研究所/农业部茶树生物学与资源利用重点实验室，杭州 310008 ） 摘要：昆虫脂肪酶可参与脂类消化、吸收和运输，并能介导植物的抗病虫功能。本研究通过茶尺蠖唾液腺 转录组数据库发掘到该基因片段，采用 RACE 技术克隆获得了一条茶尺蠖脂肪酶合成基因序列，命名为 EoL2 ，并检测了其在茶尺蠖不同生育期及不同组织部位中的相对表达水平。研究结果表明，EoL2 的cDNA 序列全长 1310 bp，开放阅读框为1041 bp，编码一个包含346 个氨基酸的蛋白，推测该蛋白相对分子量为 37.96 kD ，推测等电点（PI ）为8.41，具有脂肪酶典型的GXSXG 丝氨酸活性保守序列，其氨基酸序列与 家蚕相似度最高，为57%。实时荧光定量PCR 结果表明，EoL2 在卵中的表达量显著低于其它虫态；在 1 龄幼虫期的相对表达水平显著高于 2～5 龄；在成虫中的表达量显著高于蛹；在血淋巴中的表达量显著高 于中肠、表皮、脂肪体和唾液腺。 关 键 词：茶尺蠖；脂肪酶；基因克隆；表达谱 中图分类号：S435.711 文献标识码：A 文章编号：1005-9261 (2015)01-0048-09 Clone and Expression Analysis of Lipase EoL2 Gene in Ectropis oblique * * DU Qin, XIN Zhaojun , YANG Ziwei, LI Xiwang, CHEN Zongmao, SUN Xiaoling (Key Laboratory of Tea Biology and Resources Utilization, Ministry of Agriculture/Institute of Tea Research, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Hangzhou 310008, China) Abstract: Herbivore lipases participate in lipid digestion, absorption and transportation; and mediate interactions between plant and pathogens or herbivore insects as well. Based on transcriptome analysis of Ectropis oblique salivary glands, a putative gene encoding a lipase gene was obtained by rapid amplification of cDNA ends for the first time, which was named as EoL2 . The relative expression levels of EoL2 in different stages and tissues were measured. The results show that EoL2 contains an open reading frame of 1041 bp which encodes a protein of 346 amino acid with a putative molecular mass of 37.96 kD and an isoelectric point of 8.