2蛋白组学-二维电泳1幻灯片.pptVIP

蛋白质组学 浙江大学 生命科学学院 江 辉 zhedajianghui@163.com 密码：shenghua 蛋白质组学研究思路和技术 第二章 二维电泳与蛋白质分离 一、蛋白质的提取与样品制备 二、二维等电聚焦-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 三、胶上蛋白质检测技术 一、蛋白质的提取与样品制备 从生物材料中获得所需蛋白质样品的过程 意义 蛋白质组分析的基础，也是研究工作第一步 制备的完整性、纯度、浓度对下面分析非常重要 无完全通用技术（技术和大量经验的结合） 包括分离、提取、纯化（分开、结合、省略） 分离：生物样品提取液中的蛋白质与其它大量杂质分开 提取：将已经与其它物质分开的蛋白质提取出来（如沉淀等） 纯化：对提取的蛋白质进一步清除杂质成为纯度高的蛋白质样品（如亲和纯化等） 二维电泳分析中的样品制备（目标蛋白在细胞中的存在方式） 稳定性（热、pH、蛋白酶、化学试剂等） 丰度 定位（膜、细胞质、细胞器等） 溶解性（可溶、微溶、难溶、不溶） 分离难易程度 制备变性、活性蛋白 二维电泳分析中的样品制备 制备原则： 尽可能采用简单方法进行样品处理，以避免蛋白质损失。 （1）明确研究目标，获得尽可能多的感兴趣蛋白。 （2）不同类型的蛋白质需要不同的方法 （3）考虑目标蛋白性质，细胞破碎选择温和和激烈两种方法 应使所有待分析的蛋白样品全部处于溶解状态（包括多数疏水性蛋白），且制备