生物能学和生物氧化教学基本要求1掌握新陈代谢的概念和特点.docVIP

第六章 生物能学和生物氧化 教学基本要求代谢研究可以在两种状况下进行，一种是以生物体作为整体进行活体研究，称之为“in vivo”；另一种是进行无细胞体系研究，模拟某种细胞环境测定某种酶对底物的催化作用，这种离体研究称之为“in vitro”。 物质代谢的研究进展主要得益于现代物质分离制备和分析技术的进展，特别是同位素示踪技术、核磁波谱技术等，这些技术的发展使物质代谢研究产生了质的飞跃。下面就代谢的常用研究方法加以介绍。 突变体在代谢研究中的价值 遗传突变体在新陈代谢研究中有巨大的应用价值。1914年G.W.Beadle 和E.L.Tatum在对大量的丝状真菌突变体研究基础上提出了著名的“一基因一酶”假说。生物体所有的反应都是在酶催化下进行的，一个酶的缺失或失活将可能导致一个代谢途径的中断。遗传突变虽然是发生在核酸上的变异，但最终结果可能导致某个酶的活性降低或丧失，进而导致某一中间产物的积累，这对大型生物来说就可能导致某种疾病的发生甚至死亡。通过对积累的中间产物分析和突变体的遗传分析，就能发现某个代谢途径的中间环节。这种突变体对于微生物代谢研究更有价值，微生物突变体很容易通过特异的培养基来保持，研究材料能够得到保证。 同位素示踪技术 同位素有两种类型：一类为稳定性同位素，如15N是14N的稳定性同位素，稳定性同位素不产生质量衰变；另一类为放射性同位素，它是不稳定的同位素，产生放射性粒子或射线，质量发生衰变，有一定的半衰期，如32P、34S、3H、14C等。 用同位素示踪技术进行物质代谢研究给物质动态代谢研究提供了极大的便利。一方面化合物被同位素标记后，其性质不发生改变，对物质代谢本身不产生影响；另一方面无论是稳定性同位素还是放射性同位素都能够被有效地检测出来。 稳定性同位素可用质谱仪(mass spectrometer)进行检测，如15N标记的化合物其质量要比普通14N化合物大，利用质谱仪测定就能跟踪标记化合物的走向。 放射性同位素可以采用盖革计数器(Geiger counting)、液体闪烁计数器(liquid scintollation counting)以及放射性自显影(autoradiography)等方法来跟踪和测定。盖革计数器、液体闪烁计数器等能对放射性物质进行定量分析。放射性物质产生的射线或粒子能对仪器内的闪烁体物质作用，使之产生闪光或荧光，产生光的强度与射线或粒子的强度成比例。当光信号被转换成电子信号时，放射性物质的量就能被确定。放射性自显影技术是利用放射性物质能使感光底片上的感光物质曝光，类似普通摄影中照相底片产生影像一样。当生物体被含放射性物质饲喂后，放射性物质在生物体中的流向可以通过放射性自显影技术进行观察，也可以根据曝光强度对放射性物质的量进行估算。 酶抑制剂的应用 生物体通过对细胞中酶的数量和活性的调节控制可以实现对细胞中代谢反应的速率和类型的控制。例如，在糖酵解代谢途径的研究过程中使用了醛缩酶的抑制剂碘乙酸导致果糖1，6-二磷酸的积累，比较使用和不使用碘乙酸情况下代谢中间物，就知道在糖酵解中果糖-1，6-二磷酸在醛缩酶催化下转变成甘油醛-3-磷酸和磷酸二羟丙酮。 核磁共振技术 原子核是带正电荷的粒子，它的自旋会产生一定方向的磁场，称之为磁矩。如果将原子核放入外加的磁场中，自旋产生的磁矩与外加磁场产生相互作用。当一定频率的电磁波照射外加磁场中的自旋核，处于低能状态的自旋核就会吸收电磁波的能量，发生电子跃迁，从低能态转变成高能态，也就产生所谓的核磁共振现象。发生能量跃迁的核也就产生了核磁共振波谱(nuclear magnetic resonance spectroscopy, 简称NMR)，该共振波谱在一定程度上反应了原子核所处的环境。 原子核的外部是电子云，核外电子也不停地转动，产生一种环电流，由此而产生一个次级磁场，它对外加磁场具有电子屏蔽效应。不同化学环境的原子核，核外电子云分布不同，受到屏蔽作用的强度也不相同。核外电子云密度大的，屏蔽作用也就越大，反之亦然。总之，原子核所受到的磁场作用是由外加磁场和次级磁场共同作用的结果。 在相同的外加磁场中照射一定频率的电磁波，受到不同屏蔽作用的原子核吸收电磁波的能量必然不同，这种现象称为化学位移。化学位移反映了原子核的特定化学环境。不同原子核的化学位移的绝对值很小，难以测定。通常通过比对标准样品来测定化学位移的相对值，并以此来判断分子的结构信息。例如以1H谱来判断分子外围结构信息，以13C谱反映有机物“骨架”的结构信息。 由于核磁共振分析不会对样品产生破坏，因此可以在活体中进行，能真实地反映有机体内化学反应的变化情况，在生物化学研究特别是代谢研究中具有独特的优势。 体系、焓、熵和自由能体系体系，在热力学中又称为系统（system），是指研