凝胶色谱的应用.pptVIP

凝胶色谱技术 凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。凝胶色谱主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。 凝胶色谱应用的分类 分子量的测定 根据凝胶色谱的原理，样品物质在凝胶色谱柱中的洗脱性质与该物质的分子大小有关。因此选用不同的凝胶色谱柱后，能方便地测定物质的分子量。用此法测定分子量时，可以在各种PH值、离子强度和温度条件下进行。所测定的物质可以是天然状态，也可以是变性后的。 分离多组分混合物 在一个多组分混合物中，因各组分的分子量的不同，可以用凝胶色谱法将其各组分分开。当被分离组分的分子量相距较大时，如进行蛋白质和氨基酸，核酸和核苷酸等分离时，选择大颗粒、高交联度的凝胶。而当分离物质的分子量差别较小，则选择一种胶粒能使被分离的组分均包括在该胶粒的分布范围内。 脱盐与分离纯化 特别是在生物大分子的分离纯化过程中，经常使用盐进行盐析或洗脱，其高浓度的盐会给下一步的纯化带来不便，因此需将其全部或大部分除去。透析法除盐不仅耗时较长，而且较烦琐。凝胶色谱脱盐就是一种简单又快速的方法。由于脱盐是将分子量相距很大的两类物质的分开，所以一般用于脱盐的凝胶多为大颗粒、高交联度的凝胶。此时，溶液中大分子（如蛋白质）的kd=0，盐类的kd=1，易于分离脱盐。实际中常用G-25进行脱盐，其效果不仅比透析法快的多，而且比较完全，并且回收率高。 去热源 热源是微生物产生的某些可以使人发热的物质，多为内毒素，是制药中必须去除的物质。内毒素是一个含脂肪A、糖类和蛋白，是带负电的复合大分子。内毒素经常是多聚体，凝胶过滤层析可有效地将之去除，特别是在小分子药物。选用的凝胶可以与脱盐类似，只是此时热源等大分子物质的kd=0，而小分子药物的kd=1，同样可以很好而且很方便地去除热源类物质 * * 分子量的测定 分离多组分混合物 脱盐与分离纯化 去热源 *