史俊岩《病原生物学实验课》病原生物实习2.pptVIP

病原生物实习（二） 实验内容 细菌的培养 1、了解常用培养基的制备（录像）、分类、功能 ★2、学习和掌握伊红美蓝（EMB）培养基的制备 ★3、学习并掌握分段划线法接种细菌 4、了解实验室常用的消毒灭菌的方法，掌握高压蒸汽灭 菌技术 ★血清学检测-肥达氏反应 培养基分类及功能 按照培养基物理状态 (1)液体培养基：不加任何凝固剂，用于繁殖细菌。 (2)固体培养基：培养基中加入凝固剂，常用于细菌分离和 纯化。 　(3)半固体培养基：是在液体培养基中加入少量凝固剂而呈 半固体状态。可用于观察细菌的运动和 短期保持菌种。 按照培养基用途 (1)基础培养基：供细菌生长所需的基本的营养物质。 (2)营养培养基：配合某种细菌特殊营养要求，加入一些营 养物质。 (3)选择培养基：培养基中加入某种化学物质，抑制 某些细菌的生长，而有利于另一些细菌的 生长。 (4)鉴别培养基：是在培养基中加入特定的底物和指示剂， 观察细菌在其中生长后对底物的作用如 何，从而鉴别细菌。 E.M.B培养基 原理 组成：无糖培养基＋乳糖＋伊红＋美蓝 指示剂、抑菌剂 原理：细菌 乳糖 产酸：伊红＋美蓝 紫黑/紫红 结果：非致病菌-分解乳糖 菌落变黑，有金属光泽 致病菌-不分解乳糖 菌落无色、半透明（粉色） EMB agar E.M.B培养基 制法 ①3g粉末溶化于60ml蒸馏水中,小烧瓶，锡箔纸封口 ②15磅20min高压灭菌，倾倒在平皿中，静置10min. 高压蒸汽灭菌器 平板划线接种法 原理：通过在平板上划线，将混杂的细菌在琼脂平表面充分 的分散开，使单个细菌能固定在一点上生长繁殖，形 成单个菌落，以达到分离纯种的目的。若需从平板上 获取纯种，则挑取一个单个菌落作纯培养。 用途：分离出纯种细菌，以作纯培养。  肥达氏反应 原理：肥达氏反应通常用已知的伤寒杆菌“O”、“H”菌液和 甲、乙型副伤寒杆菌“H”菌液与病人血清作定量凝集 实验，检测病人血清中有无相应抗体存在，根据抗 体含量多少及增长情况用于伤寒、副伤寒病的辅助 诊断。 材料 ①待检可疑伤寒病人血清(1:10稀释) ②诊断菌液：伤寒杆菌“O” (O) 伤寒杆菌“H” (OH) 甲型副伤寒杆菌“H” (PA) 乙型副伤寒杆菌“H” (PB) ③生理盐水 ④吸管，小试管等。 方法 1 2 3 4 5 6 NS（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 未知血清 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 (1:10) 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 菌液(摇匀) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 (4种，1种/人) 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 (阴性对照) 37℃水浴过夜 病原生物实习（三） 实验内容 肥达氏反应结果观察 肠道病原菌的分离鉴定（2） 细菌的生长状态及菌落观察（示教） 金黄色葡萄球菌在人群中分布及耐药性的调查 实验动物感染试验 结果 H凝集：絮状，以疏松大团沉于管底，易碎 O凝集：颗粒状，以坚实凝片沉于管底，不易摇碎 凝集程度的判定以“＋”、“－”号表示 ＋＋＋＋ 上清完全透明，细菌全部形成凝集块 ＋＋＋ 细菌绝大多数凝集，液体有轻度混浊 ＋＋ 50％细菌形成凝集，液体半澄清 ＋