变形链球菌luxs基因高表达对生物膜.pdfVIP

·554· ．牙体牙髓病学研究． 变形链球菌luxS基因高表达对生物膜 形成的影响 何智妍王玉霞黄正蔚 【摘要】 目的通过构建变形链球菌luxS基因高表达株，研究该菌的密度感应luxS基因对生物 膜形成的影响。方法PCR扩增变形链球菌luxS基因片段与双酶切的大肠杆菌一链球菌穿梭表达载 体pIBl69连接，构建pIB—luxS质粒；将其电击转化人变形链球菌，筛选出高表达株，经电泳、蛋白质印 迹法鉴定构建成功。观察野生株和高表达株的生长曲线(』4。值)；通过甲基噻唑基四唑法比较两种菌 株在不同时间点及培养基中含不同质量分数(0、0．125％、0．25％、0．5％)蔗糖时的生物膜形成量 (4，。。值)，激光扫描共聚焦显微镜观察生物膜结构，实时PCR检测相关基因的表达(以野生株为对照 组)，实验均重复3次。结果luxS片段插入正确，目的蛋白表达，高表达株成功构建，且体外稳定传 代。变形链球菌野生株及高表达株在浮游模式的生长曲线无差异，但高表达株细菌在14和24h时生 物膜A，。值分别为0．400+0．009和0．609_+0．041，均显著高于相同时间点野生株(A。值分别为0．352± 著高于野生株(0．8