中国药品检验标准操作规范2010年版108拉曼光谱法.docVIP

拉曼光谱法 1 简述 拉曼光谱法是研究化合物分子受光照射所产生的散射光与入射光能及差和化合物振动频率、转动频率的关系的一种重要分析方法。 当一束具一定频率（ν=ν0）光照射到样品分子上，入射光将被分子散射。大部分散射光子是弹性（或瑞利、Rayleigh）散射，意味着这些散射光子的频率和入射光相同。极少部分（约为百万分之一）散射光子是非弹性散射，其散射光频率为νν=ν0±νν)，散射频率小于入射光频率称为斯托克斯散射ν=ν0-νν)，另一大于入射光频率的称为反斯托克斯散射ν=ν0+νν)。散射光与入射光频率之差ν=νν)实际上就是分子的振动频率，这个现象被称为拉曼散射。拉曼谱线的频率虽然随入射光频率而变化，但拉曼散射光的频率ν和瑞利散射光频率（也等于入射光频率）之差是不随入射光频率而变化。而与样品的分子振动、转动能级有 图1 典型的拉曼光谱仪示意图 2.1 激光光源（激光器） 拉曼光谱仪中所使用的激光器，根据所用的材料不同大致可分为气体激光器、固体激光器、半导体激光器、染料激光器等四大类。 表1列出几种在药学应用中经常使用的激光。紫外激光也可有特殊应用，但是由于种种缺点使它在常规分析中受限。 表1 药学应用中的主要激光 激光波长， 纳米（近似整数） 类型 激光典型功率 波长范围（纳米）斯托克区域（1000cm-1~4000cm-1） 注释 近红外光 1064 固态（钕：YAG） 最大3W 1075~1563 常在傅立叶变 换仪器中使用 785 半导体激光器 最大500mW 791~1027 在多数色散拉曼 中广泛使用 紫外-可见光 488~632.8 离子气和固态， 双频率激光 20~50mW 488~781 荧光风险 紫外-可见 染料激光器 可调 在紫外和可见光区可调 荧光风险 另外，很多药物是结晶体，或单晶或多晶混合，且具有一定程度的空间取向。激光偏振方向与晶体取向呈不同角度照射时，其拉曼光谱会有所差异。特别应用拉曼光谱进行晶型研究时，为了避免光偏振对拉曼光谱的影响，激光应该解偏。 2.2 样品装置 可有各种各样的样品放置方式，包括直接的光学界面，显微镜，光纤探头（不接触或光学浸入）和样品附件（包括玻璃瓶样品附件、药片样品附件、阵列自动采样附件、转盘式采样附件等特殊附件）。样品测定时，样品的放置方式取决于样品的多少和种类。对于微量样品，无论是液体、溶液、还是固体粉末、细晶均可放入不同直径的毛细管中，也可直接放在表面光学平台上，采用显微拉曼技术测量；对于常量的样品可放在常规池如试剂瓶、安瓿瓶中。 样品光路也可能被设计成能获得偏振相关拉曼光谱，这种光谱通常包含附加信息，样品装置的选择通常由待分析物质所决定。然而，样品的体积、测量的速度、激光的安全性以及样品图谱的重现性应予以考虑，以优化特定应用的样品装置。 2.3 滤光装置 散射光中与激光波长相等的瑞利光要比拉曼信号强几个数量级，必须在进入检测器前滤除，瑞利滤光片几乎被普通应用于这个目的，提供了极好的排除作用和与小体积相结合的稳定性。另外，为防止样品不被外辐射源（例如：房间的灯光，激光等离子体）照射，仪器设计了各种滤波器或者物理屏障。 2.4 光波处理装置 如前所述，光波可通过色散或者干涉（傅里叶变换）来处理。任何适当的合格仪器都试用于定性测量。然而，用于定量测定时，应注意色散和线性响应可能在整个波谱范围内并不均衡（例如当使用阶梯光栅分光时）。 光路系统的作用是为了有效地利用光源强度、分离出所需要的激光波长，减少光化学反应，减少杂散光以及最大限度地收集拉曼光。各种型号的拉曼光谱仪的外光路系统的设计各不相同，其中最常见的有90°和180°两种激发配置。在90°照射系统中，激光方向与拉曼散射光方向成90°。而在180°照射系统中，激光方向与散射光方向成180° 有的拉曼光谱仪在外光路系统中的样品池前安装了光学显微镜，通过显微镜激光能够聚焦于样品表面仅为直径1μm的光斑内。这样在拉曼测试中可通过显微镜选择所需测定的样品表面，把激光束定位于某一点，从而获得该点的拉曼光谱。或者可以在某一特定的频率下对样品表面进行扫描，以测出在给定波长下拉曼散射的两维平面分布情况，这就是被称为拉曼微区探针的拉曼微测技术，如拉曼显微镜共聚焦技术。 大多数拉曼光谱仪是色散型的，分光元件是滤光器或光栅，如可调谐介电滤光器或透射全息光栅。FT-拉曼光谱仪使用干涉仪生成拉曼光谱。干涉仪可同时获得安全光谱，具有多路传输和全程优点。然而，干涉仪也可在全光谱引入噪声。 2.5 检测器 硅质CCD已经成为色散拉曼仪最常用的检测器。这种冷却的阵列检测器允许在低噪声下的快速，全光谱扫描。当与通常使用的785nm二极管激光器配合使用时，它同样有峰波长响应。傅里叶变换仪器通常采用单通道锗