九酶法测血清葡萄糖总胆固醇.docVIP

酶法（GOD–POD）测血清葡萄糖含量实验目的1．掌握酶法测定血清葡萄糖含量的原理 2．熟悉酶法测定血清葡萄糖含量 3．了解血糖变化的临床意义 实验原理本实验利用两种酶（GOD：葡萄糖氧化酶；POD：过氧化物酶）偶联酶反应定量测定血清葡萄糖含量。具体反应如下： 醌亚胺染料在500nm处有特征性吸收峰，其颜色的深浅与葡萄糖的浓度成正比。实验时采用已知浓度的葡萄糖溶液作标准管，经反应测定其A值（A标），待测样品在同样条件下反应后测定其A值（A待）。通过计算可得样品中葡萄糖的浓度。实验器材与试剂1．器材 学生实验仪器一套分光光度计比色皿恒温水浴箱低速离心机离心管2．材料及试剂（1）酶试剂：葡萄糖氧化酶1 200U，过氧化物酶1 200UU是酶的活性单位，4氨基安替比林0.8mmol/L。 （2）0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.4）Na2HPO4·7H2O 22.5g，KH2PO4 2.16g溶于蒸馏水中，定容至1 000ml。 （3）葡萄糖标准液：5.55mmol/L(100mg/d)。 mmol/L 2.3实验样品：新鲜无溶血血清 【实验步骤1．酶工作液配制 酶试剂与缓冲液根据标本量，临用前按体积比1︰4混匀，2～8oC可保存一个月。 2．标本处理 抽取全血3～5ml，置于37oC保温5min，3 500rpm离心5min，取上清液备用。 3．取支小试管进行编号，按表 试管号 试剂 空白管 标准管 待测管 蒸馏水（μl） 10 - - 标准葡萄糖（μl） - 10 - 待测血清（μl） - - 10 酶工作液（ml） 1.5 1.5 1.5 各管加好后混匀，置37水浴保温20min，0.5cm光径比色皿在500nm波长下比色。 试管号 试剂 空白管 标准管 待测管 蒸馏水（μl） 10 - - 标准葡萄糖（μl） - 10 - 待测血清（μl） - - 10 酶工作液（ml） 充分混合，37oC水浴15分钟 蒸馏水（l） 各管加好后混匀，0.5cm光径比色皿在50nm波长下比色。（1）支试管为一组对照，所加入试剂量及一切反应条件（反应温度、湿度及时间）应保持一致。 （2）酶工作液的体积视当时的反应条件而定，此为建议值。反应后的红色溶液吸光度值适当（A值在0.2到0.5之间）即可。 （3）10μl液体不易精确加入，实验时要仔细检查微量移液器的密封性。此外，微量移液器Tip头外壁沾有的少许残留液体应在提出试剂瓶前在瓶口刮掉。 4． 记录A值，并进行计算。 根据Beer定律计算： 因：A待/ A标= C待/ C标(因每一管中加入的其他试剂体积一致) 故：C待= C标·A待/ A标 C待：血清中葡萄糖浓度； C标：标准液中葡萄糖浓度 A待：葡萄糖待测管吸光度值； A标：葡萄糖标准管吸光度值 代入已知数据即得结果。 注意事项1．标准液吸取后应立即盖上，以防水分挥发。 2．液体浑浊或有絮状物视为失效。 3．本法特异性高，维生素C谷胱甘肽左旋多巴引起负偏差。 临床意义血糖是人体内的重要能量来源，其含量受到体内激素及其他多种因素共同调节。正常情况下空腹血糖含量维持在稳定水平（本法测得人血糖的正常值约为3.89 ～6.11mmol/L），其含量测定可用作代谢综合症例如糖尿病的临床检测指标。 空腹血糖含量低于3.0mmol/L时，临床指示低血糖。低血糖分为生理性低血糖和病理性低血糖。生理性低血糖饥饿或剧烈运动所致；病理性低血糖胰岛素分泌异常肝功能严重衰退等。 空腹血糖含量高于7.22～7.78mmol/L时，临床指示高血糖。血糖浓度高于8.89 ～10.00mmol/L，即超过了肾小管重吸收葡萄糖的能力，在尿液中可检测出葡萄糖，称为糖尿。高血糖性糖尿分为生理性和病理性两种。如摄食过多或输入大量葡萄糖，可引起饮食性高血糖；情绪激动或精神紧张，肾上腺素分泌增加，可出现情感性高血糖如血糖升高超过肾阈值出现糖尿，为生理性糖尿；而胰岛素分泌障碍或升高血糖激素分泌亢进所导致的高血糖，出现的糖尿属病理性糖尿。思考题1．正常人的为什么能维持在一定水平？ 2．胰岛素和肾上腺素对血糖有何影响？为什么？ 3．本测定血糖的基本原理是什么？在情况下需做血糖含量的测定？