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大肠杆菌群检测 方法： 用平板涂布法将样品稀释后（每个水样做3个浓度）涂布到伊红美蓝培养基后，待长出菌落，观察符合特征的群落，计算菌落数目，从而求出总数目。 {培养基及试剂配制}------伊红美蓝培养基 成分 　　蛋白胨 10g 　　乳糖 10g 　　磷酸氢二钾 2g 　　琼脂 20~30g 　　蒸馏水 1000ml 　　2%伊红水溶液 20ml 　　0.5 %美蓝水溶液 13ml 　 先将琼脂加至900ml蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为7.2~7.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115灭菌20min。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。 1．称量 按培养基配方比例依次准确地称取酵母提取物、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。蛋白胨很易吸潮，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净、擦干，再称取另一药品，瓶盖也不要盖错。 2．溶化 在上述烧杯中可先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解。待药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶化的药品中，再加热溶化，在琼脂溶化的过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底使烧杯破裂。最后补足所失的水分。 3．调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH值，如果pH偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH值，直至pH达7.6。反之，则用1mol/L HCl进行调节。注意pH值不要调过头，以避免回调，否则，将会影响培养基内各离子的浓度。 对于有些要求pH值较精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法，可参考有关说明书）。 4．分装 按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。 涂布平板法： 1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。以8 000-10 000 r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。 2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。 3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL灭菌吸管。 4.将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后编号，然后用无菌吸管吸取0.1ml菌液对号接种在不同稀释度编号的琼脂平板上。再用无菌刮铲将菌液在平板上涂抹均匀，每个稀释度用一个灭菌刮铲，更换稀释度时需将刮铲灼烧灭菌。在由低浓度向高浓度涂抹时，也可以不更换刮铲。将涂抹好的平板平放于桌上20—30min，使菌液渗透入培养基内，然后将平板倒转，保温培养，至长出菌落后即可计数。 菌落统计方法平板选择 1.细菌常选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落计数标准。每一稀释度采用两个平板菌落的平均数，如两个平板其中一个有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长平板作为该稀释度的菌落数，如片状菌落不到平板的一半，而另一半菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全板菌落数。 计数方法 ? 作平板菌落计数时，一般无用肉眼观察，用钢笔或蜡笔在平板上进行点数，必要时可借助于放大镜检查有无遗漏的微小菌落。在计数出各平板菌落数后，求出同一稀释度菌落的平均数。 表1 平板上菌落数对应的标准差 平板上菌落数(个/皿) 30≤x≤50 51≤???????????? x≤99 100≤x≤300 标准差(±) 10.0 20.0 50.0 ? 如三个重复分别为43、32、46，则平均值为40．3，（x-x）2分别为72.9、68．89、32.49，δ＝± 7．37，写成±7．4（一）。 将检验所得的标准差作修约处理，与标准规定的允许误差作比较，只要越出规定的极限数值都判定为不符合标准要求，示例见表2。 表2 菌数的测定误差与判定示例 稀释平 板菌落数 (个/皿) 检测中 允许的误差 (δn-1) 平板菌落数测定值(个/皿) 是否符 合要求 重复1 重复2 重复3 平均值 标准差 (δn-1) 30 ≤x≤50 ±10.0 42 61 47 50.0 ±0.0(-) 符合 40 60 50 50.0 ±10.0 符合 40 60 51 50.3 ±0.0(