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微生物学培养与药敏试验（耳鼻喉专业）　 　　随着细菌耐药性的不断变化，新抗生素的开发和实验室技术的发展，尤其是面对新的日益增多难对付的病原菌(ESBLS、MRS、MRSA、VRE等)的分析和鉴定。我们深感微生物学与临床医学之间的沟通和交流是非常必要的。这样既有利于医生对感染性疾病的诊疗工作，又可提高医疗水平的检验质量。 一、眼、耳、鼻、喉拭子病原学检验 ⒈　病原菌 　 ⒈１　正常眼部是无菌的． ⒈２　正常的中耳及鼻窦内是无菌的. 健康人的咽峡部有口腔的正常菌群. ⒈３　耳、鼻、咽部的细菌感染病原菌来源于口腔。口腔中既有需氧菌也有厌氧菌，所以，其周围组织器官的感染不仅考虑是需氧菌，也须检查厌氧菌。 　　 　 　　　2 . 采集标本应注意 　　　2.１　采集耳、鼻、咽拭子时易被粘膜上的正常菌群污染，应先用无菌生理盐水冲洗后采集标本。 　　　 2.２　采集眼分泌物时，应先用无菌生理盐水冲洗眼部，然后用棉拭子拭干，再以无菌棉拭子采取分泌物。 　　　 2.３　临床标本应注意采集时机和部位（使用抗菌药物前、痰标本应尽量从深部咳出、脓性分泌物一定要取深部的分泌物）。 　　2.４　盛标本的容器须先经灭菌，但不得用消毒剂或酸类处理。 　　2.５　尽快送检　容器上应贴有送检号和病人姓名的标签。标本采集完毕后应尽快送检，搁置时间长会影响检验结果。如不能立即送检，一般应予以冷藏保存送检。某些检本（如淋病奈瑟氏菌和脑膜炎奈瑟氏菌）在送检过程中应注意保温。抽血后的培养瓶不能放冰箱。 　二、 血培养 1．局部感染送检血培养的理由 感染性疾病种类 早期出现菌血症 颅内感染 　 50-80% 肺炎 　　 30% 化脓性关节炎 　20-70% 骨髓炎 　 30-50% 淋球菌感染 　5-90% 2. 菌血症的临床分类 菌血症据临床症状可分为暂时性，间歇性和持续性三种: 暂时性菌血症只有在发病初期才能检测到病原菌；细菌数１００／ml左右 间歇性菌血症必须在特定时间内才能分离到病原菌；细菌数４０／ml左右 持续性菌血症则在任何时间可检到病原菌；细菌数５～20 /ml左右 2.1 　采血时机： 　　　采血最好在病人寒颤发烧前半小时，此时血液中细菌量最多，当病人发烧后再采血，多数细菌已裂解死亡，使培养阳性率降低。 2.2 　采血次数： 　　　据实验研究：培养1次分离率占80％，培养2次分离率为90％，3次培养分离率达到99％。（一次培养到表皮葡萄菌应慎重。） 2.3　采血量： 　　　成人采血量为5-10ml ；儿童1-3ml　采血量在一定程度上与培养阳性成正比（每增加1ml血液=增加3%的敏感度） 通常血液与培养基的比例为1:5-1:10（稀释血液中的抗生素抗体成分）。 3．　降低血培养的污染率(皮肤和培养瓶的消毒方法)。 3.1 　皮肤消毒三步法： 　　(1) 70 %酒精擦拭静脉穿刺部位待30秒钟以上 。 　　(2) 一根碘伏棉签消毒皮肤：1%～2%碘酊 30秒（或10%碘伏作用 60秒）从穿刺点向外以1.5cm～2cm直径画圈进行消毒 。 　　(3) 70%酒精脱碘。 3.2 　培养瓶消毒程序二步法： 　　(1) 用70%酒精(或碘溶液) 消毒血培养瓶橡皮塞子,酒精作用等待60秒。 　　(2) 在血液注入血培养瓶之前,用无菌纱布清除橡皮塞子表面剩余的酒精,然后注入血液。 　4. 血培养瓶适合各类无菌体液标本增菌 　　无菌体液经过增菌培养大大提高了阳性率.(风湿科周××脑脊液标本用常规方法培养为无细菌生长,采用增菌的方法培养三次均为新型隐球菌). 　　　无菌体液包括: 骨髓、血液、脑脊液、胸水、腹水、关节液、心包液、玻璃体液、泪管积液、脑组织液、浸出液、渗出液、深部脓液、羊水、腹膜透析液、血浆引流液、等等,均可采用增菌的方法培养. 5．血培养阳性的多极报告方式 　　一级报告:　 电话立即报告革兰氏染色形态. 革兰氏染色结果可指导医生为患者经验选择抗生素治疗,并作为实验室进行细菌鉴定补充试验的参考依据. 　　二级报告: 　依据细菌革兰氏染色形态特点,选择适当的培养基转种并立即进行抗生素敏感试验