杂交三倍体泥鳅的染色体组稳定性分析-海洋生物学专业论文.docxVIP

摘要为探讨多倍体鱼类杂交后代的染色体组稳定性，本研究以不同倍性泥鳅为研究对象制备一种新型杂交三倍体泥鳅（正交2n ×4n，反交4n×2n），并采用空气干燥法制备染色体标本，对其杂交后代的染色体数目、核型、带型及染色体荧光原位杂交（FISH）进行系统研究，具体结果如下：1.不同倍性泥鳅杂交后代染色体数目组成（1）杂交三倍体泥鳅早期发育情况：对照组（87.45%）、正交组（81.47%）、反交组（80.68%）三组之间平均受精率差异性不显著（p0.05）；对照组（81.35%）与正交组（87.73%）、正交组（87.73%）与反交组（90.13%）之间平均孵化率差异不显著（p0.05）；对照组（93.00%）与反交组（92.02%）间孵化率差异显著（p0.05）；正交组（96.44%）与反交组（92.02%）两组之间正常孵化率差异极显著（p0.01）；对照组（83.55%）、正交组（91.93%）、反交组（87.66%）三组之间平均成活率差异显著（p0.05）；正交组（91.93%）与反交组（87.66%）两组之间平均成活率差异极显著（p0.01）。（2）杂交三倍体泥鳅不同发育阶段的倍率变化：正交杂交三倍体泥鳅早期混合胚胎、6月龄及12 月龄3个阶段的整三倍体率（3n=75）分别为22%、26%和28%，反交三倍体泥鳅3个阶段的整三倍体率分别为20%、41%和54%；正交杂交三倍体泥鳅3 个阶段的非整三倍体率（3n＞75or3n＜75）分别为78%、74%和72%，反交杂交三倍体泥鳅3个阶段的非整三倍体率分别为80%、59%和46%。（3）正反杂交三倍体泥鳅早期单个胚胎的染色体组成：对照组的单个胚胎染色体数目在41-50范围内，在单个胚胎中整二倍体率为50%、非整二倍体率为50%；正交杂交组的单个胚胎染色体数目在64-82范围内，在统计的30个单个胚胎中整三倍体率为45.8%，亚三倍体率为26.9%，超三倍体率为27.3%；反交杂交组的单个胚胎染色体数目在61-82范围内，在统计的30个单个胚胎中整三倍体率为42%，亚三倍体率为47.8%，超三倍体率为10.2%。（4）杂交三倍体泥鳅的不同阶段染色体核型分析：早期胚胎阶段正交组整三倍体染色体数目为3n=75，核型为15m+6sm+54t，NF=96；亚三倍体染色体数目为3n=73，核型为15m+6sm+52t,NF=94；超三倍体染色体数目为3n=76，核型为16m+6sm+54t, NF=98；六月龄正交组整三倍体染色体数目为3n=75，核型为15m+6sm+54t，NF=96；亚三倍体染色体数目为3n=72，核型为15m+6sm+51t，NF=93；超三倍体染色体数目为3n=77，核型为15m+6sm+56t，NF=98；十二月龄正交组整三倍体染色体数目为3n=75，核型为12m+8sm+55t，NF=95；亚三倍体染色体数目为3n=71，核型为16m+6sm+49t，NF=93；超三倍体染色体数目为3n=76，核型为18m+8sm+50t，NF=102；早期胚胎阶段反交组整三倍体染色体数目为3n=75，核型为14m+9sm+52t，NF=98；亚三倍体染色体数目为3n=73，核型为13m+6sm+54t，NF=92；超三倍体染色体数目为3n=77，核型为18m+7sm+52t，NF=102；六月龄反交组整三倍体染色体数目为3n=75，核型为15m+5sm+55t，NF=95；亚三倍体染色体数目为3n=73，核型为13m+6sm+54t，NF=92；超三倍体染色体数目为3n=76，核型为14m+6sm+56t，NF=96；十二月龄反交组整三倍体染色体数目为3n=75，核型为16m+6sm+53t，NF=97；亚三倍体染色体数目为3n=72，核型为13m+6sm+53t，NF=91；超三倍体染色体数目为3n=77，核型为13m+6sm+58t，NF=96。2.杂交三倍体泥鳅的Ag-NORs,CMA3/DA/DAPI, FISH（1）Ag-NORs：对照组2n ×2n 杂交后代间期核及中期分裂相中最高银染点数为2个，杂交组(2n×4n、4n×2n)杂种后代间期核及中期分裂相中最高银染点数为3 个，经核型分析均位于第1对中部着丝粒染色体(M1)的端部区域。（2）CMA3/DA/DAPI：对照组2n×2n中第1对中部着丝粒染色体（M1）的端部区域显示有2I个明亮的CMA3阳性部位，杂交组(2n×4n、4n×2n)中第1对中部着丝粒染色体（M1）的端部区域显示有3个明亮的CMA3阳性部位。（3）FISH：对照组2n×2n 中第1对中部着丝粒染色体（M1）的端部区域可以检测到二簇杂交信号，而在杂交组(2n×4n、4n ×2n)中第1对中部着丝粒染色体（M1）的端部区域可以检测到三簇杂交信号