陆地棉fps基因的克隆及其在烟草中的功能分析-植物学专业论文.docxVIP

摘要摘要棉酚是棉花中重要的次生代谢产物之一，具有抗虫及抗病害的作用。棉酚在棉花中 产生于植物中的类异戊二烯代谢途径，其中的法尼基焦磷酸合酶和杜松烯合成酶是棉酚 合成中的关键酶。法尼基焦磷酸合酶是杜松烯合酶的上游酶，合成法尼基焦磷酸，法尼 基焦磷酸是以后代谢步骤的共同前体，法尼基焦磷酸经过异十三烷合酶等酶的作用合成 植物生长所必须的结构物质，即初生代谢物质，法尼基焦磷酸经杜松烯合酶的作用，经 环化，合成杜松烯，杜松烯是棉酚类物质的共同前体。本文克隆了陆地棉中的法尼基焦 磷酸合酶，对其在陆地棉中的信息进行了分析，确定了其在陆地棉基因组中有两个拷贝， 在棉花开花时期的各个部位都有表达，且在叶片中最高。并构建成植物过表达载体 pBI-35s-Fps。通过本实验室已克隆到的杜松烯合酶基因构建植物过表达载体 pBI-35s-Cdn。并将两基因克隆成植物过表达载体双核载体pBI-35s-Cdn-35s-Fps。将上述 三种载体分别转入烟草，经过分子实验筛选到阳性植株，并对阳性转基因烟草中的法尼 基焦磷酸及杜松烯的含量进行检测，力图在烟草这种基因工程模式植物中证明棉花中这 两种与棉酚合成有关的酶的关系，及两种酶对棉酚合成的共同前体物质杜松烯含量的影 响。分别对植物过表达载体pBI-35s-Fps、pBI-35s-Cdn、pBI-35s-Cdn-35s-Fps转化烟草 得到的阳性植株利用高效液相色谱检测其中FPP的含量，并检测烟草挥发油中的δ-杜松 烯相对含量进行对比分析。Fps阳性烟草植株FPP的含量有所提高；δ-杜松烯含量的检 测中三种载体的阳性烟草植株其含量都有增加，双价载体的阳性烟草植株δ-杜松烯含量 增高相对最多。两种酶对提高棉酚的含量有一定的作用。关键词棉酚陆地棉法尼基焦磷酸合酶δ-杜松烯合酶AbstractAbstractGossypolisoneofimportantsecondarymetabolitesincotton,itcanresistinsectand disease.Isoprenoidmetabolicpathwayofgossypolincottonplaysakeyroleinprimary metabolismandsecondarymetabolismofplants.Farnesylpyrophosphatesynthaseand δ-cadinenesynthasearekeyenzymesinthesynthesispathwayofgossypol.Farnesyl pyrophosphatesynthaseisupstreamenzymeofδ-cadinenesynthase’s,whichcatalyze synthesisoffarnesylpyrophosphate.Farnesylpyrophosphateiscommonprecursorin metabolicsteps.Aftercatalysisofthirteenalkylsynthaseenzymefarnesylpyrophosphateturn toessentialforplantgrowth,theprimarymetabolicsubstances.Farnesylpyrophosphateturn toδ-cadinenebytheactionoftheδ-cadinenesynthase,whichisthecommonprecursorof gossypolsubstances.InthisresearchwehaveclonedthecDNAoffarnesylpyrophosphate synthasegeneinGossypiumhirsutumL.,andanalyzedthemoleculeinformationofit.Indicate thatFpsgenehastwocopiesincottongenomeandithasaconstitutivetypeexpressionin cottonatflowerphase.ThenconstructedplantexpressionvectorPBI-35s-Fps.Constructedthe δ-cadinenesynthasegenethatthelaboratoryhasbeenclonedintoconstructplantexpression vectorPBI-35s-Cdn.Andthetwogenewasclonedintoplantexpressionvectordualvector PBI-35s-Cdn-35s-Fps.Thethreevectorswereintroducedintotobaccobymolecular