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* 专题3 植物组织培养技术 课题1 菊花的组织培养 一、原理： 课题1： 菊花的组织培养 细胞的全能性 ①定义： 已经分化的细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能。 ②原理： 生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因。 受精卵生殖细胞体细胞 ③全能性的比较: 二、植物组织培养 细胞离体 必要条件： 一定的营养物质、激素和其他外界条件 原理: 细胞的全能性 从活植物体上切下进行培养的那部分细胞、组织或器官 相关概念: 外植体 植物组织培养流程图 脱分化： 再分化： 愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞。 由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物细胞的脱分化，或去分化。 脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或者芽等器官，这个过程叫做再分化。 人参的愈伤组织 菠萝的愈伤组织 1、影响植物组织培养的因素 （1）植物材料的选择 烟草和胡萝卜的组织培养较为容易 枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果 菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝 （2）培养基的配置 MS培养基主要成分包括： 大量元素: N、P、 S 、 K、Ca、Mg等 微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、 Co等 有机物、植物激素 讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？ 答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长必须的大量元素和微量元素两大类。 ①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素 生长素类： （2，4－D）、（IAA）、（NAA）、（IBA） 细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤（ 6－BA）、玉米素（ZT） 赤霉素类： 赤霉酸（GA3） （3）植物激素的影响 ②生长素和细胞分裂素作用 植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势 分化频率高 同时使用 细胞既分裂也分化 先使用细胞分裂素后使用生长素 有利于细胞分裂，但不利分化 先使用生长素，后使用细胞分裂素 实验结果 使用顺序 生长素 细胞分裂素： 有利于根的分化 生长素 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑制根的分化 生长素、细胞分裂素适中： 促进愈伤组织生长 ③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例对植物细胞发育方向的影响 （4）pH、温度、光照 pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每日用日光灯照射12h 3、植物组织培养过程: 离体组织或细胞 植物体 脱分化 细胞分裂素≈生长素 愈伤组织 芽 根 细胞分裂素生长素 细胞分裂素生长素 再分化 植物细胞培养 1、培育无病毒植株 2、 培养紫草愈伤组织,提取紫草素（治疗烫伤和割伤的药物以及染料和化妆品的原料） 4、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法 4、植物组织培养的应用： 3、诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力的胚状体结构，包裹上人造种皮，制成人工种子，可以解决有些作物品种繁殖能力差，结子困难或发芽率低等问题 人工种子 二、实验操作 （一）制备MS固体培养基 MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4。C保存配制好的培养基母液来制备 1、配置各种母液 ①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存 ②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液 ③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量 2、配置培养基 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml ① 配制培养液 ② 调PH ③培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素 3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌 1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 （二）外植体消毒 2、消毒 ①流水冲洗 菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右 ② 酒精处理 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗 ③消毒液处理 取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液