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2011年销售部技术知识培训手册 （深圳市绿诗源生物技术有限公司） 目录： 1、ELISA类型和试剂盒的原理。 2、产品的应用范围。 3、产品的组成和常用设备仪器。 4、产品技术参数解析。 5、试剂盒优缺点。 6、回收率的添加和计算。 7、试剂盒质量好与差的评价标准。 8、假阳性和阴性产生的原因，如何去消除。 9、实验过程中的注意事项。 10、曲线的分析和试剂盒软件的使用。 2010-12-13 制定 试剂盒的原理 1、ELISA类型 双抗体夹心法：测抗原 （成正比） 双抗原夹心法：测抗体（成正比） 间接法：检测抗体常用的方法。 （成正比） 竞争法：测抗体 （成反比） 竞争法：测抗原 （成反比）　 小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定， 可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多，结合在固相上的酶标抗原愈少，最后的显色也愈浅。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。 2、公司产品原理 公司试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测样本中的药物，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的药物和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗药物抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的药物含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出药物含量。 原理反应式： ※（标准品 ，半抗原） Ag + Ab + E + A + B + 终止液 结合模式： Ab + ※ = Ab·※ (游离成分） Ag + Ab = Ag·Ab + E = Ag· Ab·E 注释： Ag ：包被抗原 Ab：抗体 E ：酶标二抗 A、B液：TMB显色液 终止液 ：硫酸 二、产品应用范围（客户群体、检测样本等） 客户群体：政府机构(例如：肉检所、检验检疫局、农产品检测中心等)、水产品公司、肉制品公司、蜂蜜公司、奶制品企业、禽畜养殖业（正大、雨润、双汇）、科研单位及高校等。 检测样本：禽畜的肌肉组织、肝脏（鸡/鸭/猪/牛/羊、 水产品（鱼，虾）、尿液、血清 、牛奶、、奶粉、蜂蜜、肠衣等。 三、产品组成和常用设备仪器 产品组成： 1、酶标板：每条8孔，一板12条 2、标准液7瓶（1ml/瓶）：标准品一、标准品二、标准品三、标准品四、 标准品五、标准品六、标准品七（高标准） 3、酶标记物 …………………………红色帽 4、抗体工作液 …………………………蓝色帽 5、底物A液 …………………………白色帽 6、底物B液 …………………………黑色帽 7、终止液 …………………………黄色帽 8、20X浓缩洗涤液 ……………………白色帽 9、2X浓缩复溶液 ……………………透明帽 10、衍生化试剂 …………………白色帽（呋喃类） 11、说明书一份 12、产品质量检验报告一份 13、盖板膜一张 实验室常用设备仪器： 具备的仪器：酶标仪、通风处、真空泵、打印机、恒温培养箱、冰箱 匀质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g） 微量移液器：单道 20ul～200ul、100ul～1000ul、多道 250 ul 有机试剂 ：不同的产品所需试剂不同，主要常见的有乙酸乙酯、正己 烷、乙腈、二氯甲烷、乙腈-HCL、乙腈-NaOH、三氯乙酸、 HCl、NaOH等 四、产品技术参数解析 1、灵敏度：试剂盒能检测到待测抗原的最低浓度。（最小检出量） 灵敏度越高越好，对于低浓度药物浓度检测出的结果更准确。但是 一般试剂盒灵敏度是根据国家出口标准而定。 2、检测下限：试剂盒用该样本的处理方法，能检测到样本中待测药物 的最低含量。 检测下限 = 灵敏度 * 样本稀释倍数 但是有的试剂盒对样本背景干扰有影响，所以检测下限会根据样本 干扰程度而调整。一般检测下限越高越好。 3、交叉率：指在同一测定方法中两种以上不同抗原对同一种抗体同样特异性结合。 交叉率反映的是该包被抗原与药发生特异结合率高才能被抗原检测 出残特异性结合能力强弱。只有药残抗原与包被抗原 4、回收率：反应试剂盒质量好坏标准之一。详见第六节。 5、样本稀释倍数：根据样本前处理方法设计所对样本浓度稀释的比例。 五、试剂盒的优缺点 1、优点：1、灵敏度高、快速