ABI 7500 及 7500 fast 型实时荧光定量PCR仪官方安装培训教程.Image.Marked.pdfVIP

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2018-05-09 发布于湖北
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ABI 7500 及 7500 fast 型实时荧光定量PCR仪官方安装培训教程.Image.Marked.pdf

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ABI Prism® 7500型荧光定量PCR仪用户基本操作培训美国应用生物系统中国公司客户服务部 1 内容提要 1、仪器简况 2 、定量PCR的数学原理 3 、定量PCR的化学原理 4 、等位基因鉴定原理 5 、定量PCR 实验 6、定量PCR的数据处理 7 、日常维护 8 、应用举例 2 仪器简况 7500功能一览 • 绝对定量(Absolute Quantification) – 自动计算基线、阈值、C 值、浓度、百分比 T • 相对定量(Relative Quantification) • 等位基因分型(Allelic Discrimination) • 阴阳性鉴定(Plus/Minus with IPC) 4 7500推荐使用的荧光组合报告荧光(Filter A) FAM™ 或SYBR® Green I 报告荧光(Filter B) VIC™ 或JOE™ 报告或淬灭荧光(Filter C) NED™或CY3™或TAMRA™ 参比荧光(Filter D) ROX™ 或Texas Red® 报告荧光(Filter E) CY5™ 5 定量PCR的数学原理 PCR曲线有两种表达形式线性图谱半对数图谱 7 典型的PCR分4个阶段平台期线性增长期指数增长期基线期 8 起点定量与终点定量起始DNA量是样本中本来的量，更有意义；终点DNA量经过PCR “加工” ，不是研究所需要的数据起点定量误差小，终点定量误差大终点定量同一个样品重复96次起点定量 9 什么是C 值 T 定义：从基线到指数增长的拐点所对应的循环次数 CT值必须位于指数增长阶段内线性图谱半对数图谱 C 值 C 值 T T 10 C 值与起始DNA浓度的关系 T C 值 T C = - k lgX