快速制备水稻基因组DNA+PCR模板的煮沸法.pdfVIP

技术与方法 !#$%’() *%+ ,-$.+) 快速制备水稻基因组/01 234 模板的煮沸法 赫 然 黄小乐 刘秋云 许新萍（中山大学基因工程教育部重点实验室与生物工程研究中心，广州/%!/） 5.6%7 ,-$.+ 8.9 4*:+ 29:*9*-.% .8 !#$% %’()% )): ; (*+(,% %.=# /01 *) 234 !=:6*- ， ， ， （ 01 234 05)*6 783+#9: 9;5 8=#=4 75 784#?84@ !# $#% ’()*’+)*% ), -#.# /.01.##*1.0 ), /234’+1). 51.16+*% ’.2 71)+#4.)8)0% ， ， ） 9#6#’*4 :#.+#* ;).06’. .1=#*61+% -3’.0)3 /%!/ 提要 文章发展了一个采用煮沸法快速制备水稻基因组A*) ?B2 模板的程序，成功地从水稻基因组扩增到了相应基因。 关键词 煮沸法； 模板；水稻 ?B2 由于?B2 技术具有操作简便且灵敏度高的特 结果与讨论 点，所以在分子生物学研究中得到了广泛应用。但 是提取植物 A*) 的过程耗时费力，寻找快速有效 用煮沸法制备的籼稻基因组A*) 模板，我们 的制备植物 ?B2 模板的方法，是植物分子遗传学 扩增到了籼稻微管蛋白（ ）基因内含子（图 E=O)% 研究的重要内容。本文基于粗糙脉孢霉等生物方 ），经 酶切得到了证实，获取 和 % @’3 -); % / OD ［，］ % ! 法 ，发展了快速制备水稻基因组A*) ?B2 模板 的程序，具有良好的重复性。 材料与方法 材料 籼稻（ ）由湖南杂交水稻 ?*%’ 6’+1=’ CCD , 1.214’ EI 研究中心惠赠。E3F 酶为E3G323 公司的1H E3F 。 ? 方法 ? ; 基因组/01 234 模板制备 取 , % @ 新鲜 水稻叶片于液氮中研磨，粉末悬浮于! 9 E1 缓 ! 冲液。在沸水上煮 % J % K84，冰浴 % K84 。于室 温下%- L 0 离心/ K84 。将上清储存在M ! N 中，取- 9 作 ?B2。 ! 图 籼稻微管蛋白（ ）基因内含子 扩增结果 ? ; ? 234 扩增 扩增完整的%/ OD 的微管蛋白 % E=O)% ?B2 梯级分子量标准（ 、 、 、 、 、 ）； 无模 %, ! , %, , / , / , !/ , % PO ! , （ ）基因内含子。 引物为： E=O)% ?B2 %, 666 EB6 板负对照，扩增