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实验九 环境因素对微生物生长发育的影响 ★基本原理 环境因素（包括物理因素、化学因素和生物因素），如温度、渗透压、紫外线、pH、氧气、某些化学药品及拮抗菌等对微生物的生长繁殖、生理生化过程产生影响。不良的环境条件使微生物的生长受到抑制，甚至导致菌体的死亡。但是某些微生物产生的芽胞，对恶劣的环境条件有较强的抵抗能力。我们可以通过控制环境条件，使有害微生物的生长繁殖受到抑制，甚至被杀死；而使有益微生物得到发展。 ☆物理因素对微生物生长的影响 ★微生物生长的最适温度 不同的微生物生长繁殖所要求的最适温度不同，根据微生物生长的最适温度范围，可分为高温菌、中温菌和低温菌，自然界中绝大部分微生物属中温菌。 (1)取8支装灭过菌的肉膏蛋白胨培养液试管，每管装5 ml，分别标明20℃,28℃,37℃和45℃四种温度，每种温度2管。 (2)向每管接入培养18--20 h的大肠杆菌菌液0.1 ml, 混匀。 (3)取8支装灭过菌的豆芽汁葡萄糖培养液试管，每管装5 ml，分别标明20℃,28 ℃,37℃和45℃四种温度，每种温度2管。 (4)向每管接入培养18-20 h的酿酒酵母菌液0. 1 ml，混匀。 (5)将上述各管分别按不同温度进行振荡培养24 h观察结果。根据菌液的混浊度（肉眼观察或测OD值）判断大肠杆菌和酿酒酵母菌生长繁殖的最适温度。 ★渗透压对微生物的影响 微生物在等渗溶液中可以正常生长繁殖;在高渗溶液中细胞失水，生长受到抑制；在低渗溶液中，细胞吸水膨胀，因为大多数微生物具有较为坚韧的细胞壁，细胞一般不会裂解，可以正常生长，但在低渗溶液中溶质（包括营养物质）含量低，在某些情况下也会影响微生物的生长。而不同类型微生物对渗透压变化的适应能力不尽相同。（大肠杆菌在0.5~3% NaCl条件下生长良好；盐沼盐杆菌在20~30% NaCl条件下生长良好） 图 圆滤纸片法测药物杀菌作用 1.滤纸片；2．细菌生长区；3．抑菌区 (3)分别用无菌滴管加4滴（或0. 2 ml)菌液于相应的无菌培养皿中。 (4)将融化并冷却至45—50℃的肉膏蛋白胨培养基倾入皿中约15 ml，迅速与菌液混匀，冷凝，制成含菌平板。 (5)用镊子取分别浸泡在土霉素、复方新诺明、新洁尔灭、红汞和结晶紫药品溶液中的圆滤纸片各一张，置于同一含菌平板上。 (6)将平板倒置于37 ℃温箱中，培养24 h后观察结果，测量并记录抑菌圈的直径。根据其直径的大小，可初步确定测试药品的抑菌效能。 ★不同pH对微生物生长的影响 (1）配制肉膏蛋白胨液体培养基，分别调pH至3、5、7、9和11，每种3管，每管盛培养液5 ml，灭菌备用。 (2)取培养18--20 h的大肠杆菌斜面1支，加入无菌水4 ml，制成菌悬液。 (3）每管肉膏蛋白胨液体培养基中接种大肠杆菌液1滴（或0. 1 ml)，摇匀，置37℃温箱中培养。 (4）配制豆芽汁葡萄糖液体培养基，分别调pH至3、5、7、9和11，每种pH 3管，每管盛培养液5 ml，灭菌备用。 (5)按上法制成酿酒酵母菌悬液，每管接种1滴（或0. 1 ml)，摇匀，置28℃温箱中培养。 (6)培养24 h后观察结果，根据菌液的混浊程度判定微生物在不同pH生长情况。