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细胞健康检测 2012.5.11 王春红 内容 ADME检测 细胞凋亡 细胞活力检测 细胞毒性检测 谷胱甘肽测定 线粒体功能检测 ADME:毒药物动力学 对外源化学物ADME过程的研究意义 可用来确定与毒性发生有关的靶器官或组织的暴露特征。 可为在其他的毒性研究的剂量选择提供有用数据。 有助于阐明两种或两种以上外源化学物联合毒作用的机制。 可通过改变外源化学物ADME过程，以预防和治疗外源化学物中毒。 代谢（转化）类型 可分两类:第一类包括氧化、还原及水解过程；第二类为结合过程，第一类转化产物再经与体内某些代谢物结合，产物一般水溶性加大，利于排泄。 　　（1）第一阶段反应（第一类型）：氧化、还原及水解等。氧化，如醇氧化、醛氧化、单胺氧化、氧化脱氢及N-氧化等；还原，如硝基还原成氨基（-NH2）。 　　（2）第二阶段反应（第二类型）：即结合反应，使药失效，随尿排出。含羟基、羧基、胺基的化合物与葡萄糖醛酸结合成酯、醚、酰胺化合物；硫酸可与酚类药物及酚性类固醇结合成硫酸酯；N-甲转移酶使伯胺、肿胺及叔胺甲基化，以S-腺苷甲硫氨酸作为甲基供应体；磺胺类及芳香族氨基等在乙酰辅酶A参与下乙酰化。 ADME Metabolism产品 P450-Glo? Assays Screening Systems GSH-Glo Assay UGT-Glo? Assays Screening Systems MAO-Glo? Assay Pgp-Glo? Assay System UGT活性检测 哺乳类动物最重要的结合反应 药物结构中的功能基团结合生成葡萄糖醛酸GA的结合物 UDPGA（尿核苷二磷酸葡萄糖醛酸）：GA的活性供体 Pgp-Glo? Assay Systems Pgp, 也被称为MDR1 和ABCB1, 是一种 170kDa 的完整的质膜蛋白，其生物学功能为依赖ATP 的药物泵，在多药抗药性和某些不良药物相互作用中发挥重要作用。 Pgp-Glo? 试剂盒检测化合物对膜制备物中重组人类Pgp 活性的影响。该试剂盒建立在依赖于ATP 的萤火虫萤光素酶反应上，该反应可产生光信号。ATP 先与Pgp 共同孵育，然后Pgp ATP 酶反应被终止, 未被消耗的 ATP 由萤光素产生的发光信号而被检测出来。Pgp依赖的发光信号的降低反映了Pgp 对ATP 的消耗，因此信号减少得越多，Pgp 的活力就越高。相应地，若待测样品中含有可刺激Pgp ATP 酶的化合物，这个反应产生的发光信号会显著低于未经处理的对照组。 细胞凋亡（apoptosis /(programmed cell death,PCD) 细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。细胞凋亡与细胞坏死不同，细胞凋亡不是一件被动的过程，而是主动过程，它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用，它并不是病理条件下，自体损伤的一种现象，而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。 细胞活力 在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力. Cell-Titer 产品 CellTiter 96 Non-Radioactive Cell Proliferation Assay (MTT) CellTiter 96 AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Assay (MTS) CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS) CellTiter-Blue Cell Viability Assay CellTiter-Fluor Cell Viability Assay CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay 细胞毒性 细胞毒性是由细胞或者化学物质引起的单纯的细胞杀伤事件，不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。 细胞毒性检测主要是根据细胞膜通透性发生改变来进行的检测，常用以下几种方法： 　　MTT、XTT法：利用线粒体内部酶的活性，可以将特定的四唑盐类进行转化，然后通过酶标仪进行检测 　　LDH的方法：通过检测细胞培养上清中LDH的酶活性，来检测细胞毒性 　　其它酶方法：如检测上清中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶的活性等 细胞毒性 细胞毒性是由细胞或者化学物质引起的单纯的细胞杀伤事件，不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。 谢谢！ 100 + 20 CellTiter-Glo 10 Minutes Add CellTiter-Glo? Reagent Read