光合细菌透射电镜观察.PDFVIP

维普资讯 研究报告 生命科学仪器 2007第5卷 ／5月刊 光合细菌的透射电镜观察 魏玉利 邹 宁 (鲁东大学生命科学学院，山东烟台264025) 摘要 以光合细菌为材料 ，进行了电镜超薄制片，染色后在透射电镜下观察获得 了清晰的细胞超微结构图像。 关键词 光合细菌 ，透射电镜 ，超微结构 中图分类号 Q939．99 文献标示码 ：A 光合细菌 (photosyntheticbacteria，简称 PSB) 磷酸缓冲液 (0．1M，pH7．4)漂洗五次，每次 是一种能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用有机物 都要以3000r／rain离心2rain使其聚集，每次大约 作供氧体兼碳源，进行不放氧光合作用的细菌，广泛 10mins，共约3h，以洗去多余的固定液，防止醛类与 分布于水田、湖沼、江河、海洋、活性污泥和土壤中。 锇酸反应，影响固定效果，此过程也应在冰上进行。 PSB在水产养殖、废水处理、种植业、畜牧业和新能 4． 固定 源生产中有广泛的应用。本文以光合细菌为材料进 离心后，每瓶用0．5ml1％锇酸再次固定2h，在4 行了电镜样品制备和观察。 ℃冰箱中进行 。 5． 漂洗 1 实验材料 磷酸缓冲液 (0．1M，pH7．4)漂洗3次，每次 光合细菌，为鲁东大学生科院生物技术实验室 5mins，洗去多余的锇酸，因为锇酸会与乙醇反应生 培养。 成沉淀，在冰上进行。同样每次都要以3000r／min离 固定液：戊二醛 (5％)与多聚甲醛 (4％)混合 心 2min。 固定液 ，1％锇酸。 6． 脱水 缓冲液：磷酸缓冲液 (PBS，0．1M，pH7．4o 依次用30％一50％一70％一80％一90％一95％ 脱水剂：30％、50％、70％、80％、90％、95％、 一100％酒精一100％丙酮一环氧丙烷各脱水一次，每 100％的梯度酒精 ，100％丙酮，环氧丙烷。 次 10mins；以除去细胞中的游离水 ，使包埋剂能均 包埋剂 ：Epon812环氧树脂 (沿用Luft1961年 匀的渗入细胞，使细胞具有适宜的硬度和良好的切割 的配方 ，A：B=2：8)。 性能，利于获得清晰的图像。冰浴 ，摇床上进行， 操作过程中每次都要以3000r／min离心2min。 2 实验方法 7． 浸透与包埋 浸透 ： 环氧丙烷 ：包埋剂 ：1：1(1—2h)一 1． 取材 环氧丙烷：包埋剂=1：2(过夜)一纯包埋剂 (1h)， 对光合细菌平板分离进行纯培养，然后接种到 整个过程均在 37℃进行； 三角瓶中液体培养几天。待长到密度较高时 ，以 包埋：浸透完沉降一段时间后 ，用吸管取出材 3000r／min离心2min。得到光合细菌团，取少量依次