20 生物化学实验--磷钨酸-镁沉淀法测定血清高密度脂蛋白胆固醇含量.docVIP

磷钨酸 - 镁沉淀法测定血清高密度脂蛋白胆固醇含量 【目的】 1 ．掌握磷钨酸 - 镁沉淀法测定血清高密度脂蛋白胆固醇含量的实验原理及操作方法。 2 ．了解测定血清高密度脂蛋白胆固醇含量的临床意义。 【原理】 血清中的脂蛋白可与聚阴离子及二价金属离子形成不溶性复合物，这种复合物形成的难易程度与脂蛋白分子中蛋白质 / 脂类的比例有关，比值愈小、脂类含量愈高的脂蛋白愈易沉淀，选择适当浓度的磷钨酸钠 - 镁溶液可将 CM 、 VLDL 和 LDL 沉淀，离心后上清液中仅存有 HDL ，用 “ 邻苯二甲醛 - 乙酸 - 硫酸 ” 显色法与同样处理过胆固醇标准液进行比色后，求得血清中 HDL-ch 的含量。 【器材】 1 ． 722 型分光光度计 2 ．离心机和离心管 3 ．中号试管 4 ．刻度吸量管 5 ．微量移液器 【试剂】 1 ．磷钨酸钠 - 镁溶液 称取磷钨酸 4g 溶于 50ml 蒸馏水中，然后加入 1mol/LNaOH16ml ，混匀后再加蒸馏水至 100ml ，调至 pH 为 7.6 。取此液 40ml ，加 2mol/LMgCl 2 10ml ，加入生理盐水至 100ml 。 2 ．邻苯二甲醛溶液 （ 1 ） 储存液（ 0.1g /dl ）：称取邻苯二甲醛 100mg 溶于 100ml 冰乙酸中，置棕色瓶内保存。 （ 2 ） 应用液（ 5mg/dl ）：取储存液 50ml 加无水乙醇及乙酸乙酯各 20ml ，混匀后加冰乙酸至 1000ml 。置棕色瓶内。 3 ．浓硫酸（ A·R ） 4 ．生理盐水 5 ．胆固醇标准液（ 40mg/dl ） 称取胆固醇 40mg 溶于 100ml 冰乙酸中。 【操作】 1 ． HDL 的分离 取离心管 1 支（ 9× 70mm ），加入 0.2ml 血清及 0.05ml 磷钨酸钠 - 镁溶液，混匀后于室温放置 10 分钟， 2500r/min 离心 10 分钟，此时 CM 、 LDL 、 VLDL 被沉淀，而上清液中只含有 HDL 。 2 ． HDL-ch 含量的测定 取试管 3 支，标明空白管、标准管及测定管，按下表操作。 试剂（ ml ） 空白管 标准管 测定管 含 HDL 的上清液 - - 0.05 胆固醇标准液 - 0 ． 05 - 生理盐水 0 ． 05 - - 邻苯二甲醛溶液 2 ． 5 2 ． 5 2 ． 5 浓硫酸 1 ． 5 1 ． 5 1 ． 5 将各管液混匀后，于 550nm 波长处，以空白管调 0 ，进行比色，分别读取并记录各管吸光度值。 【计算】 血清 HDL-ch （ mg/dl ）＝ 血清 HDL-ch （ mmol/L ） ＝ 正常值： 45 ～ 90mg/dl 或 1.17 ～ 2.33mmol/L 【注意事项】 1 ．离心所得上清液必须清亮透明，不能混有细微沉淀颗粒，否则需要重新离心。 2 ．加浓硫酸时需将试管斜置，沿管壁加入，注意安全。 3 ．显色稳定时间在 1 小时左右，所以要控制好实验时间。 4 ．本法测定正常值为 45 ～ 90mg/dl 或 1.17 ～ 2.33mmol/L 。 【思考题】 1 ．磷钨酸 - 镁沉淀法测定血清 HDL-ch 含量的实验原理是什么？操作过程中应特别注意什么？为什么？ 2 ．测定血清 HDL-ch 含量有何临床意义？为什么称 HDL 为对健康有益的脂蛋白？总黄酮 生物总黄酮是指黄酮类化合物，是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等。 简介 　　近年来，由于自由基生命科学的进展，使具有很强的抗氧化和消除自由基作用的类黄酮受到空前的重视。类黄酮参与了磷酸与花生四烯酸的代谢、蛋白质的磷酸化、钙离子的转移、自由基的清除、抗氧化活力的增强、氧化还原作用、螯合作用和基因的表达。它们对健康的好处有：（ 1 ） 抗炎症 （ 2 ） 抗过敏 （ 3 ） 抑制细菌 （ 4 ） 抑制寄生虫 （ 5 ） 抑制病毒 （ 6 ） 防治肝病 （ 7 ） 防治血管疾病 （ 8 ） 防治血管栓塞 （ 9 ） 防治心与脑血管疾病 （ 10 ） 抗肿瘤 （ 11 ） 抗化学毒物 等。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能时入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、活化大脑及其他脏器细胞的功能、抗脂肪氧化、抗衰老。 　　近年来国内外对茶多酚、银杏类黄酮等的药理和营养性的广泛深入的研究和临床试验，证实类黄酮既是药理因