DNA的粗提取与鉴定汇.pptVIP

　　　DNA的粗提取与鉴定;目的要求:初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法，观察提取出来的DNA物质。;方法步骤;思考题：1.为什么要吸去上清液取沉淀物？;1.提取鸡血细胞的细胞核物质;2.溶解细胞核内的DNA;3.析出含DNA的黏稠物;5.将DNA的黏稠物再溶解;6.过滤含有DNA的氯化钠溶液;7.提取含杂质较少的DNA;8. DNA的鉴定;【例l】 下图为“DNA的粗提取与鉴定”的实验示意图，其正确的操作顺序是 解析 DNA位于鸡血细胞的细胞核中。采用加蒸馏水并且搅拌的方法，可使鸡血细胞大量吸水胀破，细胞膜、核膜破坏，搅拌的机械作用更加速了细胞的破裂．释放出的核物质其实是DNA、RNA和蛋白质的混合物。在浓度较高的氯化钠溶液中核蛋白质容易解聚，DNA的溶解度也很高，经过滤便分离出含少量杂质的DNA。根据DNA在冷却的95％的酒精中凝集反应强烈的性质，进一步纯化DNA。将DNA溶解于较高浓度的氯化钠溶液中，加入冷却的95％的酒精溶液，可使DNA沉淀、浓缩，形成含杂质较少的DNA丝状物。 ;1次加酒精:第7步析出含杂质较少的DNA 2次加蒸馏水：第1步（血细胞胀破） 第3步（稀释氯化钠溶液） 3次过虑： 第1步（DNA存在于滤液中） 第4步（DNA留在纱布上） 第5步（DNA存在于滤液中） 4次调整氯化钠浓度：第2步2mol／L、第3步0.14 mol/L、第5步2mol／L、第8步0.015 mol/L的。 5次使用玻璃棒搅拌：第1步（血细胞胀破）、第2步第5步（加速DNA溶解）、第3步（稀释氯化钠溶液析出DNA）、第7步（提取含杂质较少的DNA）（整个实验共7次，提取核物质，鉴定) ;练习1．在破碎血细胞时，要先加入20 mL的蒸馏水，其作用是 A．DNA溶解水中 B．血细胞破裂，DNA释放 C．稀释血液，防止凝固 D．有利于搅拌 2．用过滤的方法得到细胞中的氯化钠溶液后，还要用酒精处理，可以得到较纯化的DNA．这是因为： A．DNA易溶于酒精，而滤液中某些杂质不易溶于酒精 B．DNA不易溶于酒精，而滤液中某些杂质易溶于酒精 C．DNA和滤液中其他成分更易溶于酒精 D．DNA和滤液中其他成分都不溶于酒精 3、与析出DNA粘稠物有关的叙述，不正确的是 　　A.操作时缓缓滴加蒸馏水，降低DNA的溶解度 　　B.在操作A时，用玻璃棒轻缓搅拌，以保证DNA分子完整 　　C.加蒸馏水可同时降低DNA和蛋白质的溶解度，两者均可析出 　　D.当丝状粘稠物不再增加时，此时NaCl的浓度相当于0.14mol/L 4、在向溶解DNA的NaCl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是 A.加快溶解DNA的速度 B.加快溶解杂质的速度 　　C.减少DNA的溶解度，加快DNA析出 D.减小杂质的溶解度，加快杂质的析出;6．在进行DNA粗提取实验时，为得到含DNA的黏稠物，某同学进行了如下操作： 在新鲜鸡血中加入适量的柠檬酸钠，经离心后，除去血浆留下血细胞备用。取5―10ml血细胞放入50ml的塑料烧杯中，并立即注入20ml 0.015mol／L的氯化钠溶液，快速搅拌5分钟后经滤纸过滤，取得其滤液。滤液中加入40ml 2mol／L的氯化钠溶液，并用玻璃棒沿一个方向快速搅拌1分钟。上述溶液中缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒沿一个方向不停地轻轻搅拌，直到溶液中出现丝状物为止，再进行过滤而得到含DNA的黏稠物。 实验结果是：所得到的含DNA的黏稠物极少，导致下一步试验无法进行。;8、DNA的粗提取与鉴定的实验(如下图)： (1) 本实验材料选用鸡血细胞液而不是用鸡的全血，主要原因是由于鸡血细胞液中含有较高含量的____________。 (2) 图A中加入蒸馏水的目的是_________________。 (3) 通过图B所示步骤取得滤液后，再向滤液中加入2 mol·LNaCl溶液的目的是__________________。 (4) 图C所示加入蒸馏水的目的是______________。 (5) 为鉴定实验所得丝状物的主要成分是DNA，可用__________试剂进行检验，颜色反应为________色。;9、填写本实验完成下列实验操作时所用试剂。 ⑴ 提取鸡血细胞中核物质 ⑵ 溶解核内DNA： ⑶ 析出2mol/LNaCl溶液中的DNA ⑷ 提