毕业论文--实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的研究.docVIP

论文评阅结果： 论文评阅人： 广州医学院成人高等教育专升本毕业论文 实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的研究 论文提交时间：2013年8月 目 录 摘 要……………………………………………………………………………….......3 关键词…………………………………………………………………………………...3 第一章HBVDNA含量与血清标记物(HBV M)的关系…………………………….3 1.1 HBVDNA含量与HBeAg抗HBe?………………………………………………3 1.2 HBVDNA含量与HBsAg／抗HBs……………………………………………… HBVDNA含量与HBV前S1蛋白、前S2蛋白、大蛋白的关系………….…4 1.4 HBVDNA含量和HBV的基因型………………………………………………. 4 1.5 HBVDNA含量与肝功能………………………………………….. …………….4 第二章HBVDNA定量的临床意义…………………………………………………5 第三章HBVDNA定量的方法………………………………………………………5 3.1 PCRELISA……………………………………………………………………..…..5 3.2竞争定量PCR(cPCR)……………………………………………………………5 3.3实时荧光定量PCR…………………………………………………………………..6 第五章 讨论……………………………………...………………………………....…7 第六章 结论………………………………………………………………...…………8 参考文献…………………………………………………………………………….....8 实时荧光定量PCR检测乙型肝炎病毒DNA的研究 【摘要】? HBVDNA定量是目前诊断乙型肝炎、判断病毒复制和评价患者肝脏病变、预后及药物疗效的重要指标之一，但在指导诊疗时仍需结合血清标记物、肝损害指标乃至HBV基因分型。HBVDNA定量的方法有PCR核酸探针杂交法、RELISA、竞争定量PCR、实时荧光定量PCR，本文综述定量检测HBVDNA意义及PCR检测方法【关键词】? 乙型肝炎病毒核糖核酸实时荧光定量PCR以下就对HBVDNA定量在诊断治疗上的定量原理和意义、定量方法作综述。HBVDNA含量与血清标记物(HBV M)的关系 　　11? HBVDNA含量与HBeAg抗HBe? HBeAg阳性是病毒复制活跃的标志，HBeAg阳性与检出HBVDNA的符合率接近100%，两者存在极强的相关性。一般认为若HBeAg阴性或抗 HBe阳性，则提示HBV复制减弱，病情得到控制。但大量文献指出，HBeAg转阴或抗HBe的出现并不说明病毒复制被控制，约50%抗HBe阳性的患者 血清检出HBVDNA。单春梅等［3］指出这可能是因为HBVDNA前C／C区基因变异，1896位G→A突变，原来TGG变成终止子(TAG)，丧失 HBeAg合成分泌功能，逃脱细胞毒T淋巴细胞(CTL)的免疫攻击。这种变异在我国乙肝患者中普遍存在，是导致病情迁延、发生慢性肝炎、甚至肝硬化重要 原因之一。姜燕等［4］指出当乙肝病毒携带者(ASC)血清HBVDNA含量为103～107copies／mL时，HBeAg阳性模式HBVDNA含量 显著高于HBeAg阴性者，血清HBeAg模式与HBVDNA定量之间有显著相关性(r=028，t＝119，P＜005)，HBVDNA含量大于小于这个范围则不存在相关性。由此推测，只有当体内HBVDNA含量在一定的范围内，机体的免疫应答才与HBVDNA含量相对应。 12? HBVDNA含量与HBsAg／抗HBs? HBsAg阳性代表机体感染HBV，不代表复制情况；HBsAb为中和抗体，标志着机体产生免疫力。HBsAg阴性不能排除HBV的感染，Liang等［5］报道36例HBV M均阴性的慢肝患者，PCR检测有11例(31%)HBVDNA阳性。范火亮［6］从健康体检者抽取100份全阴标本，其中有2份PCR检测HBVDNA 为阳性，说明ELISA检测HBV M全阴并不表示无HBVDNA复制。分析可能有几种原因：HBV的S区点突变导致HBsAg抗原性改变，HBsAg不被检出；急性感染的窗口 期；HBsAg检测方法灵敏度不足；血清亚型的漏检等。大量文献报道，HBsAg阳性可能HBVDNA阴性，HBsAg阳性的标本HBVDNA检出率约在70%～90%之间。可能因为HBVDNA和宿主细胞基因组整合了，表达HBsAg，但没有DNA的复制；或