1分子生物学第八章-转录和RNA加工.pptVIP

什么是RNA编辑？有哪些类型？它符合传统的中心法则吗？它有哪些生物学功能？ 什么非编码RNA(non-coding RNA)、tmRNA、miRNA、siRNA、RNAi？它们有哪些功能？ miRNA和siRNA的区别和联系？ * A typical mammalian mRNA has many introns. The basic problem of nuclear splicing results from the simplicity of the splice sites, and is illustrated in Figure 22.4: what ensures that the correct pairs of sites are spliced together? The corresponding GU-AG pairs must be connected across great distances (some introns are 10 kb long), avoiding the connection of incorrect pairs. We can imagine two types of principle that might be responsible for pairing the appropriate 5 and 3 sites 典型的哺乳动物mRNA有许多内含子。核剪接中一个基本的问题在于剪接点的简单性。如图30.4，是什么保证了正确的配对点能剪接在一起。对应的GU-AG之间有着很大的距离（一些内含子有着大于10kb的长度），就算这样也不会出现错误的结合。我们能想像到两种可能的配对理论 u?????? 将特殊的内含子末端的点相联结可能是RNA的本质的性质，这个将需要特定的序列或结构的匹配。 u?????? 或者所有的5′端点都在功能上等同，所有的3′端点都一无二致。但是剪接总是遵循一个法则，即保证在RNA中5′端点通常连接于下一个3′端点。 不论是剪接点还是周围的区域都没有任何序列的互补性，这就排除了内含子末端之间配对的模型。合成杂交RNA前体的实验表明在理论上，任何5′端剪接点均可被连接于任何3′端剪接点。比如说，当早期SV40转录单位的第一个外显子被结合于老鼠β-珠蛋白的第三个外显子时，杂交的内含子能被剪接出来而产生一个SV40外显子与β-珠蛋白外显子之间精确的结合体 图 30.4 剪切的连接点准确无误地相互配对。 * 核通过索套剪接 剪接机理己在利用能把内含子从RNA前体上剪接掉的体外实验中得到描述。核的外提物能剪接纯化的RNA前体，这表明剪接与转录无关。剪接也独立RNA的修饰，即使RNA即无帽子结构也无多聚腺苷尾部，它还是可以发生 。 体外实验的剪接步骤已在图30.6中给出。我们讨论的是可以确认的单一RNA类型的反应，但同时不要忘记，在体内，包含外显子的RNA是不会以自由的分子形式存在的，而是被剪接装置相互纠合在一起。 第一阶段，在5′端剪接点形成一个切口，以分开左边的外显子和右边的内含子一外显子分子。左边的外显子以直线形式存在，右边的内含子一外显子则开成索套（这里内含子5′端和内含子内一个碱基形成5′-2′键，这个目标碱基为腺苷，被称为分枝点）。 第二阶段，3′端剪接点的剪切从索套形式中释放了内含子，同时，右边的外显子和左边的外显子连接起来。为了图示方便，剪切与接合分别在各自的图形中表示。但实际上，它们是在同一次转移反应中发生的。 索套随即脱离分枝点，形成一个线性的删除内含子，然后很快被降解。 剪接必需的序列是5′端3′端剪接点与分枝点短而一致的序列。我们又知道，内含子序列的大部分都可以被毫不费力地剪除，这表明，内含子或外显子中并不一定要有“特定构型”存在。 分枝点提供了一个识别3′端剪接点的途径。酵母中的分枝点保守性较高，并具有一致的序列UNCUAAC，高等真核生物的分枝点保守性不是很强，但它在每一个位置都对嘌呤或嘧啶有一个选择优势，并保留目标腺核酸,见图30.6 分枝点位于3′端剪接点18-40的核苷酸上游区。酵母中，分枝点的突变与缺失可以阻断剪接。在高等真核生物中，当通常的分枝点缺失后，序列强制性的放松就造成其利用邻近相关序列的能力。接近3′端剪接点的位置是重要的，因为隐藏的点通常比较靠近常用点。一个隐藏的分枝序列以这种方式起作用时，剪接是正常发生的，并且外显子会给出像野生型一样的产物。因此分枝点的任务其实就是识别最靠近5′端剪接点的3′端剪接点。 形成索套的键是由内含子5′端恒定的G中5′位置与分枝点上恒定的A中2′位置结合而成的。在酵母中UACUAAC框中，这就对应于第三个A残基。 图 30.6 剪接发生在两个阶段，先是5’端外显子分离，然后连接到3