microRNA——当今生命科学领域的明星分子.pptVIP

microRNA与癌症的关联 miRNA表达谱的紊乱将加剧癌症的发生，这是因为有些肿瘤抑制因子以及原癌基因是microRNA的靶位点，若microRNA这类调控因子本身发生了功能性紊乱，本来抑制原癌基因的microRNA表达量降低了，而抑制肿瘤抑制因子的microRNA表达量却升高了，那么其最终结果就是导致了下游一系列蛋白表达量的变化以及某一条调控通路的整体混乱，进而诱发肿瘤生成。 已报道的的microRNA调控的与癌症相关的信号通路 如microRNA家族的一员let-7 miRNA，抑制人原癌基因RAS的表达，在肺癌组织中let-7表达水平通常较癌旁组织低，而RAS的表达水平则上调，这种let-7 miRNA抑制RAS蛋白表达的机制，就是一种microRNA与癌症相关的实例。 microRNA在癌症诊断中的应用 科学家通过对人肺癌、乳腺癌等疾病中miRNA的表达谱进行分析比较，发现每一种肿瘤都有若干特定的miRNA的表达水平相对于正常组织发生了变化。这些研究奠定了miRNA作为肿瘤生物学标志物在肿瘤诊断中的地位，并且提示miRNA的研究已经从实验室开始走向临床。 microRNA在癌症分型和预后判断中的应用 microRNA在癌症组织中发生的特异性变化，可以帮助定性癌症，或者诊断癌症的发展阶段。2005年Nature杂志报道了一篇论著，作者对334个样本进行miRNA表达谱研究，发现miRNA能够准确的对肿瘤进行分型，并且分型结果较mRNA表达谱更精确。2006年Cancer Cell杂志报道了一篇论著，作者通过对非小细胞肺癌病人随访，发现肿瘤组织中高表达hsa-miR-155和低表达hsa-let-7a-2的患者具有不良预后。 microRNA在癌症治疗中的应用 miRNA对于肿瘤学研究的另一个意义是治疗，microRNA是潜在的药物靶点。miRNA由于其在肿瘤的发生发展中的重要意义同时由于可操作性较强，已经作为核酸类药物靶点而越来越被看好。已有部分动物实验证实，以miRNA作为作用靶点的药物具有较好的肿瘤治疗作用。右图分别为干扰miRNA和过表达miRNA在癌症治疗中的尝试。 microRNA.flv 血清microRNA在癌症诊断中的应用 我们及数个小组的研究表明，特定的血清miRNA表达谱可以构成识别癌症与其他疾病的“指纹”，为癌症及其他疾病的诊断提供一种新的非损伤性的诊断方法，该技术可能带来未来临床医学上的变革。 第二章 实验方法 SIBCB_Chen Wang Techniques covered in this session Real-time PCR Western blot Northern hybridization Solexa Plasmid Construction microRNA的stem-loop real-time PCR Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。 Western blot Protein Identification Northern Hybridization To measure the amount and size of specific miRNA. Major steps: Isolation of intact mRNA or total RNA Separation of RNA in a denaturing agarose gel with formaldehyde; Transfer the RNA to a membrane in 10xSSC; Fixation of the RNA to the membrane. Hybridization of probes to immobilized RNA (vacuum bake, 80oC, 30 min). Wash in SSC/SDS solution (monitor with Geiger counter). Detection by autoradiography or phosphaimaging. microRNA的芯片 microRNA的过表达和干扰 过表达使用microRNA的前体（precursor oligonucleotides），干扰使用microRNA的反义寡核苷酸（antisense oligonucleotides），转染媒介是Lipofectamine 2000 (Invitrogen)。 microRNA的Solexa测序 PLASMID CO