动物细胞培养三.pptVIP

2.2.1动物细胞培养和核移植技术 （一）、概念 是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 （三）、过程 1、无菌、无毒的环境： 3、温度和PH （五）植物组织培养和动物细胞培养的比较 * * * * * * 专题2.2动物细胞工程 动物细胞培养 动物细胞融合 生产单克隆抗体 动物细胞核移植 动物细胞工程技术 动物细胞工程的基础 （二）、原理 细胞分裂增殖 一、动物细胞培养 幼龄动物 剪碎组织 胰蛋白酶处理 单个细胞 原代培养 取动物器官 和组织 制成细胞悬液 传代培养 归纳 过程 取 的组织、器官剪碎 细胞悬浮液 酶 贴满瓶壁的细胞 分散成单个细胞 加入 动物胚胎或幼龄动物 胰蛋白酶或胶原蛋白 培养液稀释 接触抑制 原代 培养 遗传物质 改变 原代细胞 培养 加 液 10—50代细胞(细胞株) 未 遗传物质 改变 无限传代（细胞系） 已 传代培养 胰蛋白 酶 思考题： 1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ 因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。 成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖，且细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。 3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？ 催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋白质(胶原蛋白等)。 4、细胞膜的主要成份是什么？ 蛋白质和磷脂 5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？ 能 6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？ 7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ 注意时间的控制 不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近 ?对培养液和所有培养用具进行无 菌处理。 ?添加一定量的抗生素（防止培养 过程中的污染）。 ?定期更换培养液，清除代谢产物。 （四）、动物细胞培养的条件 保证细胞顺利的生长增殖 ?需要有糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。 ?合成培养基通常需加入血清、血浆等一些天然成分。 2、营养： 培养室中控制,使之达到 温度为36.5 ± 0.5℃、PH为7.2-7.4 ?培养箱中提供O2和CO2（95%空气和 5% CO2 ） ?O2的作用：细胞代谢所必需的。 ?CO2的作用：主要是维持培养液的PH 4、气体环境： 植物体 培养结果 获得 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 葡萄糖、 、植物激素 培养基特有成分 细胞 细胞的 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 全能性 增殖 蔗糖 血清、血浆 细胞 细胞或某些蛋白质等 （六）、动物细胞培养技术的应用 （5）细胞的生理、药理、病理研究。 （1） 培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植。 （2） 生产许多有重要价值的生物制品。如 病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。 （3）基因工程的受体细胞。 （4）检测有毒物质及毒性大小。 （一）、动物细胞核移植的概念： 动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体. 克隆动物：用核移植的方法得到的动物。 二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 （二）、分类： 胚胎细胞核移植： 体细胞核移植： 细胞分化程度低，恢复 全能性容易 细胞分化程度高，恢复 全能性困难 去核卵母细胞 供体 细胞 重组细胞 重组胚胎 新个体 代孕母牛C 胚胎移植 卵母细胞培养 无性生殖 （三）、体细胞的核移植过程 高产奶牛A 供体细胞培养 供卵奶牛B 培养至MII期 电刺激使两细胞融合 激活 传代培养10代以内 （四）、体细胞核移植技术的应用前景 1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程 2、保护濒危物种 3、生产医用蛋白质 及组织器官的移植的供体 （五）、体细胞核移植技术存在的问题 1、成功率仍然非常低。 2、绝大多数克隆动物还存在健康问题。 3、克隆技术的各个环节也有待进一步改进。 4、对克隆动物食品的安全性问题也存有争议。 二 动物体细胞核移植 技术和克隆动物） 一动物细胞培养 概念 过程 原理 应用 概念 过程 应用 存在问题 体细胞核移植 胚胎细胞核移植 1、细胞