2010.3.19Ch3.沉淀法.pptVIP

* * * 第三章 沉淀法 盐析法 有机溶剂沉淀 有机聚合物沉淀 选择性沉淀 等电点沉淀 适当地改变抽提液中某些因子（如pH、离子强度、极性、金属离子等），使抽提液中有效成分的溶解度发生变化从而进行分离纯化。 一、基本概念 也称溶解度法 中性盐溶解度大，与蛋白质争夺水，破坏水膜并中和蛋白质胶体表面电荷，从而使蛋白质沉淀析出。 二、盐析法（Salting out） ２.１ 通常指中性盐沉淀法 不同蛋白质在不同的中性盐浓度下析出，据此可对样品中的杂蛋白及目的蛋白进行分级沉淀。 通常蛋白质受到中性盐的保护，不会因为盐析而变性失活。 阳离子：一价离子比二价有效，其中： NH4+ K+Rb+Na+Cs+Li+ 阴离子：多价离子比一价有效，如： PO43-SO42-C2O42-Ac-Cl-NO3- (NH4)2SO4 ２.１.１　不同离子盐析能力大小 磷酸钾/钠的价格比较高，Na2SO4在40℃以下的溶解度较低，只适合于热稳定性好的目的蛋白。 选用（NH4）2SO4的理由 便宜，溶解度大 ，对温度敏感性低 不易引起变性，有稳定蛋白质结构的作用。 有的酶或蛋白质用2～3mol/L浓度的(NH4)2SO4保存可达数年之久 ； 20度：767g/L 0度：697g/L 分离、纯化蛋白质效果比较好（有的提取液加入适量硫酸