化学发光免疫分析及其临床应用.ppt

化学发光免疫分析及其临床应用 汪子伟 宁海，2011.7.21 荧光（fluorescence） 发射光的能量来自激发光 即激发一停，发光立即停止，余辉≤10-8s(0.01μs)者 荧光基本不受温度影响 磷光 发射光的能量也来自激发光 激发光停止后，发光还会一段时间，即余辉≥10-8s (0.01μs) 又分为短期磷光(余辉10- 8s ~10- 4s )和长期磷光(余辉≥10- 4s) 磷光的衰减强烈的受温度影响 时间分辨荧光免疫分析中作为标记物的稀土离子(如Eu3+、Tb3+、Sm3+和Dy3+)产生的“长寿命荧光”实际就是长期磷光(可长达数十、数百、乃至数千μs) 化学发光(chemiluminescence) 发射光的能量来自发光物的化学(氧化还原)反应，简称“发光” 生命物质的化学发光称为生物发光 发光是常见的自然现象，人们最熟悉的发光生物是萤火虫，在海深2000米以下，多数生物都发光 免疫定量分析发展历史 第一代：放射免疫定量分析技术 第二代：酶联免疫定量分析技术 ELISA 磁酶免 过渡技术：荧光免疫定量分析技术 时间分辨 AKP＋4-甲基伞形酮 第三代：化学发光免疫定量分析技术 早期酶促化学发光 最新直接化学发光 标记免疫的发展 MAGLUMI 1000 MAGLUMI 2000全自动化学发光分析仪 MAGLUMI 2000 PLUS全自动化学发光分析仪 在甲状腺疾病中的应用 系已知最常见的内分泌紊乱 仅美国就有2100万人罹患此类疾病 每年为此支付的保健费超过100亿美元 近50岁的女性有10%TSH异常 近60岁的女性有17%TSH异常，此年龄的男性也有9%异常 认识甲状腺疾病 发病过程通常缓慢而不易觉察 其症状常被患者疏忽 该病有可能被误诊为其他疾病（例如高脂血症、月经失调、更年期或抑郁症） 甲状腺疾病—临床意义 明显的甲状腺疾病的后果早已被认识 然而，未诊断的甲状腺疾病仍然是严重的公共健康问题 最近的研究结果认为…“甲状腺疾病通常是未被检出、可能与有害的结果相联系的疾病” 甲状腺病理学 下丘脑/垂体病变 1% 原发性甲状腺问题 99% 甲状腺功能亢进 由于甲状腺激素过量引起的特征性症状，常导致： 甲状腺机能减退的临床特征 疲劳 健忘/思维缓慢 抑郁症 注意力难以集中 头发稀疏/脱发 体毛脱落 皮肤干燥皱缀 体重增加 怕冷 血清胆固醇增高 甲状腺功能试验 甲状腺疾病一般有轻微的临床表现、需要实验室检查加以确诊 应当恰当地选择甲状腺疾病的筛查和管理的实验检查项目 项目选择不当，造成无效成本增加及不正确的诊断（或不恰当的治疗） 甲状腺试验项目 A.循环中甲状腺激素水平的测定 采用免疫学方法测定T4、T3和rT3 采用免疫学方法测定FT4和FT3 B.甲状腺激素合成调节的评估 -TSH测定（用于甲状腺疾病的筛查） C.甲状腺自身抗体检测 自身免疫性甲状腺疾病：TPO-Ab、TG-Ab Graves’ 病的标志：TSH-R-Ab(TR-Ab) 甲状腺功能异常的诊断 甲状腺分泌的激素（T4、T3、fT4、fT3)的异常与垂体前叶分泌的TSH的异常一致时，病变在垂体。若一起增高，为继发性甲状腺机能亢进（如垂体肿瘤）；若一起降低，为继发性甲状腺机能减退 TSH的异常与甲状腺分泌的激素（T4、T3、fT4、fT3)的异常不一致时，病变在甲状腺，当TSH增高时，甲状腺分泌的激素（T4、T3、fT4、fT3)降低或正常都是原发性甲状腺机能减退（后者为亚临床型）；当TSH降低时，甲状腺分泌的激素（T4、T3、fT4、fT3)增高或正常都是原发性甲状腺机能亢进（后者为亚临床型） 甲状腺功能异常患者若TPO抗体（和/或TG抗体）阳性，可认为患有自身免疫性甲状腺疾病（包括桥本病和Graves病等），桥本病的特点是TPO抗体非常高（一般在近1000或更高） Graves病的特点是典型的突眼、还有TSH受体抗体阳性 判断患者的甲状腺功能处于何种状态应监测TSH，若判断治疗效果则应观测fT4 甲状腺功能试验一般只适合没有其他严重疾病的门诊病人，住院或急诊病人应待甲状腺以外的疾病缓解后测定，除非已出现甲状腺危像 反三碘甲状腺原氨酸 ?? 又称3，3‘,5’-三碘甲腺原氨酸是正常人血清中存在的一种甲状腺激素，是T4在肝、肾、垂体及心肌等组织中经5-脱碘酶脱去酪氨酸环上的一个碘而生成的 约98%的rT3结合在血清蛋白上，其中主要为TBG，故TBG的多寡明显影响rT3的测定结果。rT3在体内降解速度较快，其半寿期为30-60分钟。它在血液中含量甚微，生物活性很低，但在不同的生理及病理状况下，血清含量有显著区别，因此，测定血清中rT3水平在临床上仍有一定意义