病原学检查课件.pptVIP

临床病原学检查 掌握：感染性疾病的诊断和治疗原则 熟悉：感染性疾病病原学实验诊断及抗生素治疗的主要实验室监测方法 了解：病原学诊断的重要性，院内感染监测 病原体检查的作用 1.感染性疾病的明确诊断 2.通过药敏试验指导临床合理用药 3.病原体监控和耐药性监控 第一节 标本采集、运送和检查方法 一.标本采集和运送 采集标本注意点： 1.标本容器必须无菌或清洁容器 2.选择最佳时间采集标本，在抗菌药物使用前 3.获取标本时，须严格无菌操作 4.标本采集后，应尽快送实验室 ㈠血 液 发热初期和高峰期采集 抗菌药物治疗前 成人每次10-20ml，婴幼儿1-5ml 专用血培养瓶 24小时内，可在不同部位采血3次 ㈡尿 液 无菌采集清洁中段尿 导尿或膀胱穿刺获得 ㈢粪 便 取含脓、血或粘液粪便置于清洁容器内 排便困难者或婴幼儿可用直肠拭子 对传染性腹泻须三次送检 ㈣呼吸道标本 1.痰：⑴自然咳痰法 ⑵气管镜采集法 2.鼻咽拭标本：同痰标本用清水漱口后采集 注意：唾液为不合格的痰标本，不应送实 验室检测 ㈤脑脊液与其他无菌体液 脑脊液标本应立即保温送检 胸腹水等体液标本应抽取2-5ml送检 ㈥泌尿生殖道标本 性传播疾病取尿道口分泌物、阴道宫颈口分泌物 生殖道疱疹常穿刺取疱疹液 ㈦创伤、组织和脓肿标本 开放性脓肿：无菌棉拭采集脓液 封闭性脓肿：无菌注射器穿刺抽取 ㈧眼、耳部标本 用拭子采样，亦可在局部麻醉后取 角膜刮屑 二.病原体检查的基本方法 1.临床标本细菌检验一般程序 一般程序 2.病原体诊断的基本方法 直接显微镜检测（microscopic examination） ⑴染色标本检查法：革兰染色和抗酸染色 ⑵不染色标本检查法：悬滴法和压滴法 2.病原体诊断的基本方法 病原体分离培养(isolation and culture)和鉴定(identification) 培养基选择 生长条件：一般大气条件 厌氧条件 微需氧条件 2.病原体诊断的基本方法 鉴定技术： 生化鉴定 血清学鉴定 数码鉴定 自动化鉴定 2.病原体诊断的基本方法 血清学诊断：查特异性抗体——肥达氏试验 病原体特异性抗原检测 病原体核酸检测：查特异基因片段DNA/RNA——PCR（荧光定量）、DNA探针杂交技术、基因芯片技术 第二节 病原体耐药性检测 一.抗菌药物敏感性试验（AST） 1.定义：体外检测抗菌药物抑制或杀灭细菌的能力，亦即是检测细菌对抗菌药物敏感性(或耐药性)。 一.抗菌药物敏感性试验（AST） 2.目的 预测抗菌药物治疗的效果 更换抗菌药物时，预测拟选药物的疗效 对常见病原菌耐药状况监测 评价抗菌药物抗菌谱及抗菌效果 一.抗菌药物敏感性试验（AST） 3.常用敏感性试验方法 ⑴手工试验:①K-B纸片琼脂扩散法 结果表示:S-Susceptible I-Intermediate R-Resistant ②稀释法（MIC） ③Etest ④耐药筛选试验 一.抗菌药物敏感性试验（AST） ⑵自动化仪器 Vitek，Microscan ⑶分子试验 PCR直接检测mecA基因 ⑷补充试验 Nitrocefin 一.抗菌药物敏感性试验（AST） 4.药敏试验结果与临床抗生素剂量关系 敏感(S)——一般剂量有效，推荐使用该抗生素用于临床治疗 中介(I)——大剂量有效，提示药物MIC接近体液或组织可达到药物浓度 耐药(R)——大剂量无效,即常规用药剂量不能达到MIC 二.耐药机制及耐药性监测试验 ㈠耐药病原体 G- bacterial: ?-内酰胺酶介导的耐?-内酰胺类抗生素的革兰阴性菌 质粒介导的产超广谱?-内酰胺酶（ESBL）的ECO,KPN 染色体编码产生Ⅰ类?-内酰胺酶的ECL,EAE 多重耐药的铜绿假单胞菌、嗜麦芽假单胞菌和不动杆菌 二.耐药机制及耐药性监测试验 ㈠耐药病原体 G+ bacterial: 耐甲氧西林葡萄球菌（MRS） 耐青霉素肺炎链球菌（PRSP） 耐万古霉素肠球菌（VRE） 高耐氨基糖苷类抗生素肠球菌 二.耐药机制及耐药性监测试验 1.耐药机制： ⑴产生灭火酶和钝化酶(?-内酰胺酶) ⑵药物作用靶位点改变：抗生素结合蛋白发生改变（PBP） ⑶细胞外膜通透性改变（减少或突变） ⑷细菌膜外排泵出系统 二.耐药机制及耐药性监测试验 2.耐药菌监测试验 ⑴ 酶介导的耐药性检测 ①直接?-内酰胺酶检