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Application使用密度梯度离心法进行腺相关病毒的纯化.PDF
Application
使用密度梯度离心法进行腺相关病毒的纯化
【himac CP-NX 超速离心机及 P32ZT 区带转头进行分离】
目前，病毒载体作为基因治疗，细胞治疗，疫苗生产的重要环节，已经被广泛使用和
关注。其中的腺相关病毒 （AAV ），是一种附属病毒，大小在22nm ，无包被。AAV
是无致病性，高安全性病毒，提供了转基因的长期表达，适用于在不分裂细胞的转基
因。
对于基因治疗等应用中的病毒载体 ，纯度要求高，需要一种高效的、高质量的生产纯
化方法，本文将以腺相关病毒为例，介绍使用 himac 超速离心 CP-NX 系列及区带转
头进行纯化的方法。
主机及转头 ：himac 超速离心机 CP-NX 系列 ，及区带转头 P32ZT
himac 超速离心机 ：
转头 ：区带转头 P32ZT
离心条件 ：
设置转速 ：30500rpm ；最大 RCF: 92500xg ；时间 ：9 小时 ；加速/减速速率：7
加/7 减 ；设置温度 ：18℃
密度梯度液 ：OptiPrepTM (AXIS-SHIELD PoC AS) 60%的碘克沙醇 （在水溶液里）
（1.32g/cm3 ）
离心步骤 ：
I ． 使用双蒸水将 OptiPrepTM 稀释 ，制作成5, 15, 25, 40, 54%的碘克沙醇密度
梯度介质
II ． 按如下顺序将双蒸水及各梯度液泵入转头 ：
双蒸水含有 AAV 的细胞裂解液 100ml
5%碘克沙醇 （1.031g/cm3 ） 300ml
15%碘克沙醇 （1.085g/cm3 ） 490ml
25%碘克沙醇 （1.137g/cm3 ） 330ml
40%碘克沙醇 （1.215g/cm3 ） 235ml
54%碘克沙醇 （1.291g/cm3 ） 235ml
总共 1690ml
III ． 流速 ：30-50ml/分钟
IV ． 收集 ：每 50ml一管进行收集 ，共 34个收集管。
结果 ：下图显示密度梯度离心结果，及密度梯度曲线。 AAV 的密度是 1.22 到
1.26g/cm3 （40-50%碘克沙醇 ），纯化的 AAV 会在蓝色条带处 ，可对编号 28-30 管进
行收集
结论 ：使用上述超离方法可以对大量的样品进行腺相关病毒的纯化 ，用于后续的研
究和应用。
如有任何其它相关问题，请随时联系天美（中国）科学仪器有限公司。
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