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植物细胞工程综合性设计实验 不同植物激素配比浓度对金毛掌嫩茎切块诱导效果的比较 摘要 以30日龄的嫩茎切块为外植体，接种在植物激素6-BA和NAA不同配比浓度及3%蔗糖、0.8%琼脂，PH为5.8—6.0的MS培养基上，并通过实验观察确定其诱导的最适浓度。 前言 金毛掌为仙人掌科仙人掌属植物，最适宜摆放在温暖通风的环境里生长，冬季室温不得低于5℃，最适宜生长温度为25℃-30℃，多肉植物对水时分敏感，此种仙人掌耐干旱性强。而为提高其繁殖速度，可通过组织培养获得更大的经济效益。 1 实验材料的准备 实验材料为购买的生长健壮、无病虫危害的30日龄的金毛掌，3%琼脂、0.8%蔗糖、MS基本培养基各母液，1mol/LHCl 和NaOH,75%酒精、0.1%升汞、果酱瓶、瓷量杯、烧杯、玻璃棒、滴管、容量瓶、移液管、洗耳球、称量纸、电子天平、电炉、pH试纸、镊子、剪刀、解剖刀、手提式高压灭菌锅等。 2 实验步骤与方法 2.1 MS母液及培养基的配制：六组的实验培养基成分：MS+6-BA 1.0、2.0、3.0、4.0、3.0、3.0（mg/L）和NAA 0.1、0.1、0.1、0.1、0.2、0.3（mg/L） 每组MS培养基母液一致，6-BA及NAA浓度配比如下： 6-BA（mg/L） 6-BA吸取量 NAA（mg/L） NAA吸取量 1.0 10 0.1 1 2.0 20 0.1 1 3.0 30 0.1 1 4.0 40 0.1 1 3.0 30 0.2 2 3.0 30 0.3 3 2.2 培养基、接种器械、接种室及超净工作台的灭菌 培养基灭菌：高温高压灭菌锅，121℃，在压力为0.1MPa时持续15-20min 接种器材灭菌：多为镊子、剪刀、解剖刀，用75%酒精浸泡 接种室灭菌：接种室拖地，接种前紫外灯照射20-30min 超净工作台灭菌：接种前紫外灯照射、无菌风 2.3 外植体的灭菌 将金毛掌嫩茎于自来水龙头冲洗30min，毛刷刷洗干净其皮刺，75%酒精浸泡10-30s，无菌水洗涤3-5次，再用0.1%升汞溶液浸泡10分钟，无菌水洗涤3-5次。 2.4 外植体的接种 把消毒好的装有培养基的容器及其他用具竖行排列，轻轻打开接种瓶，并在火焰上转动烧下瓶口，将已灭菌好的金毛掌幼嫩茎片切成1cm×1cm×1cm，接种在已配制好的新鲜培养基上，盖瓶前烧下瓶口及瓶盖。 外植体的培养 置于培养室内暗培养，温度25℃ 实验结果与分析 每种配比浓度的培养基接种了15瓶，每瓶3块外植体，接种后5天左右外植体切口处开始膨大，逐渐长出愈伤组织。 不同浓度对诱导情况 接种块数 诱导出愈伤组织块数 愈伤组织诱导率（%） BA NAA 1.0 0.1 45 14 31.1 2.0 0.1 45 17 37.8 3.0 0.1 45 19 42.2 4.0 0.1 45 12 26.7 3.0 0.2 45 20 44.4 3.0 0.3 45 17 37.8 结果分析：由上表分析可知对金毛掌嫩茎切块的最佳诱导配比浓度为6-BA3.0mg/L和NAA0.2mg/L，其诱导率为44.4%，当NAA 浓度为0.1mg/L时 ,6-BA浓度在1.0～3.0mg/L时随浓度增加，诱导率随之增加，当6-BA浓度为4.0mg/L时，诱导率下降。当6-BA浓度为3.0mg/L时，NAA浓度在0.1～0.3mg/L，愈伤组织的诱导率无明显变化。 然而此次实验并没有达到预期的效果，尽管正式实验之前进行了预实验，效果依然不好，诱导率较低。分析原因如下： 以30日龄的金毛掌为材料，由于资金有限，材料量受到限制，所切取的外植体年龄有所差别，不能很好地控制单一变量 此种金毛掌茎片较厚，且带有毛刺，给消毒增加了难度，容易引起褐化，污染培养基使其养分丢失 接种2～3天内未发现菌落，而在一星期左右部分培养基表面开始呈水迹状，外植体上或周围出现菌落，多为细菌，为外植体所带的内源菌 各接种人员操作有差别，体现在外植体大小，接种操作上，外植体过小不利于其形成愈伤组织，导致结果差别较大 除此之外，培养基、接种室灭菌不彻底，接种人员操作不规范也是一个很大的影响因素 综上，要获得更好的效果，提高愈伤组织诱导率，灭菌要彻底，外植体选材要合理，清洗干净，减少菌污染。 附图：