温度对胶原结构的影响(二维红外).doc

3.4.4 温度对胶原结构的影响 胶原蛋白作为细胞外间质对基体的热平衡发挥着重要的作用，基于热效应的各种理疗也都将通过胶原蛋白对细胞产生作用，另外，胶原蛋白作为一种天然高分子生物材料，温度对其变性过程也具有重大影响。所以，本节旨在通过二维红外相关光谱研究温度对胶原蛋白结构的影响。图3.为胶原从25℃～95℃间隔10℃升温过程中的红外吸收光谱。随着温度的升高，胶原酰胺Ⅰ带发生了蓝移，酰胺Ⅱ带吸收峰却发生了红移，并且可以看出，酰胺Ⅱ带的变化大于酰胺Ⅰ带的变化。图3.中还可以明显看出，3327 cm-1处N—H伸缩振动吸收峰由钝逐渐变尖，这就说明，温度的升高，破坏了胶原内部氢键的结合，增加了胶原的无序结构。 图3. 4000~400 cm-1范围内胶原从25℃95℃升温过程中的红外吸收光谱 Fig. 3. Variable tempaerature (25℃~95℃) FTIR spectra of Collagen in the spectra range of 4000~400 cm-1 二阶导数图谱能有效分辨出红外吸收峰中的重叠峰，能为二维红外相关分析提供大量信息。图3.8为胶原从25℃~95℃升温过程中在400~4000 cm-1范围内25℃~95℃升温过程中实际上是一个逐渐解螺旋的过程，胶原随着温度的升高，胶原分子间以及分子内的氢键被逐渐削弱，三股螺旋结构和肽链转角结构逐渐减少，而其伸展肽链及无序结构却增多。1694 cm-1、1524 cm-1、1241 cm-1为胶原胶原蛋白酰胺带的吸收峰，它们代表的是胶原分子间及分子内氢键结构，如图3.8所示，随着温度的升高，1694 cm-1、1524 cm-1处吸收峰都逐渐减弱甚至消失，同时1241 cm-1处吸收峰也发生了蓝移，这无疑说明了胶原在升温过程中，其氢键结构在逐渐减少。另外，随着温度的升高，在1704 cm-1、1504 cm-1处吸收峰逐渐增强，1451cm-1处吸收峰也发生了蓝移，由此可以推断，1704 cm-1、1504 cm-1吸收峰代表的是胶原的肽链伸展或者胶原的无序结构。 图 3. 胶原在1750- cm-1波数范围内从25℃95℃升温过程中的二阶导数图谱Fig. 3.8 Second derivative spectra in the range of 1750-1000 cm-1 for collagen 对胶原蛋白结构变化的研究主要集中在其酰胺带以及指纹变化区，图3.为胶原从25℃～95℃升温过程中~1000 cm-1范围内的二维相关分析图。其中图3.(a)为同步相关图，图3.(b)为异步相关图。同步图中的自相关峰表示胶原结构随温度的敏感程度，同步交叉峰代表了胶原的基团振动吸收峰随温度升高其结构变化取向一致的行为；而异步交叉峰则代表了胶原基团振动吸收峰随温度升高其结构变化相对独立的行为。所以，若同步相关图中出现交叉峰，表明其对应在υ1，υ2上的一对基团振动峰的强度变化在升温过程中是彼此相关的。若异步相关图中出现交叉峰，表明其对应在υ1，υ2上的一对基团振动峰的强度变化在升温过程中是彼此独立，以不同速率变化的。 图 3. 胶原在1~1000 cm-1范围内从25℃~95℃升温过程中的同步相关图(a)和异步相关图(b) Fig. 3. Synchronous (a) and asynchronous (b) spectra of collagen during varying temperature from 25℃~95℃ in the range of 1750~1000 cm-1 根据二维红外判定规则对图3.9进行分析。如图3.9(a)所示，在对角线上的1704 cm-1、1504 cm-1、1446 cm-1以及1238 cm-1处出线了自动峰，特别是在1704 cm-1、1504 cm-1处，说明了这些吸收峰所对应的基团对温度升高比较敏感，特别是1704 cm-1、1504 cm-1处吸收峰对温度最为敏感；在Φ(1704, 1504)、Φ(1, 1446)、Φ(14, 1238)、Φ(1, 1446)、Φ(1, 1238)、Φ(1, 1238)处出现了正交叉峰说明1704 cm-1、1504 cm-1、1446 cm-1以及1238 cm-1处吸收峰所对应的基团变化具有同步响应，在整个升温过程中的变化是正相关的。在图3.9(b)中，Ψ(1704, 1694)、Ψ(1, 1572)、Ψ(1, 1241)、Ψ(1, 1033)、Ψ(1, 1082)以及Ψ(1504, 1694)、Ψ(1, 1572)、Ψ(1, 1241)、Ψ(1, 1033)、Ψ(1, 1082)形成了交叉峰 cm-1、1504 cm-1处吸收峰所对应的官能团变化