试验3分子荧光法测定罗丹明B的含量.DOCVIP

教 案 授课 内容 实验 分子荧光法测定罗丹明B的含量1.掌握荧光法测定罗丹明B含量的基本原理。 2.了解F-4500型分子荧光分光光度计的基本构造和原理，并能简单的操作。 预习下一实验实验 分子荧光法测定罗丹明B的含量 一、实验原理 罗丹明B在水中是强的荧光物质，并且在低浓度时，荧光强度与罗丹明B浓度呈正比： If=kc 基此，测定一系列已知浓度的罗丹明B的荧光强度，然后以荧光强度对罗 丹明B浓度作标准曲线，再测定未知浓度罗丹明B的荧光强度，把它代入标准曲线方程求出其浓度。 图1 罗丹明B的分子结构 、仪器与试剂 1．仪器 F-4500型分子荧光分光光度计；1000 mL容量瓶2只，100 mL的容量瓶12支，1 mL的吸量管1支。 2．试剂 （1）1(10-2 g(L-1的罗丹明B储备液：准确称取1.0000 g 罗丹明B，加用二次蒸馏水定容至100 mL，将此溶液稀释100 倍就得到10-4 g(L-1的罗丹明B标准溶液。 、实验步骤 1．系列标准溶液的配制 取11只100 mL的容量瓶分别加入10-2 g(L-1的罗丹明B储备液0，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50，0.60，0.70，0.80，0.90，1.00 mL，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。 2．绘制激发光谱和发射光谱 在300~600 nm范围内扫描激发光谱；在400~700 nm范围内扫描荧光发射光谱。 3．绘制标准曲线 将激发波长固定在556 nm，荧光发射波长固定在573 nm处，测定系列标准溶液的荧光发射强度。 4．未知试样的测定 准确移取一定量1(10-2 g(L-1 的罗丹明B标准溶液于100 mL的容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，配制成未知样品。在标准系列溶液同样条件下，测定未知样品的荧光发射强度。 5．绘制荧光强度If对罗丹明B溶液浓度c的标准曲线，并由标准曲线求算未知试样的浓度。 、数据处理 1.原始数据 浓度（10-4 (g(mL-1） 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 x 荧光强度 扣除空白 2.标准曲线绘制和未知样品含量计算。 、注意事项 1.罗丹明B的浓度不要太高。 2. 实验结束后，检查仪器是否正常，关闭是否正确。 、思考题： 1.为什么罗丹明B会发荧光？ 2.荧光分光光度计有哪些部件组成？ 3.如何绘制激发光谱和荧光光谱？ 4.哪些因素可能会对罗丹明B荧光产生影响？ 4