适用于面上各种IEF等电点电泳系统-VisualProtein.PDFVIP

儀器 2 IEF Optimizer IEF Optimizer 能夠測量出樣品內的含鹽量，再透過 Voltage-Hour Calculator 計算後，可以提供您在進行 IEF 等電點膠體電泳時最適 合的條件。 1.特色和優勢 預測最佳 IEF 電泳條件，增加實驗成功率 IEF Salt Meter 可以測得樣品內鹽含量，並藉由 Voltage-Hour Calculator 計算得到最適合樣 品 IEF 條件，以進行 IEF 等電點電泳，可以減少 IEF 等電點電泳之前不斷嘗試尋找電泳條件過 程且減少二維膠體電泳發生 Overfocusing 和 Underfocusing 的情況發生 。 增加二維膠體電泳實驗再現性 在進行 IEF 等電點電泳之前，相同樣品前處理會因為人為操作而導致樣品內的鹽含量不同， 使相同樣品在相同 IEF 電泳條件下，造成實驗結果之差異而無法出現良好的再現性；藉由 IEF Salt Meter 和 Voltage-Hour Calculator 輔助，可得到各別樣品合適 IEF 電泳條件，提高二 維膠體電泳的再現性。 適用於市面上各種 IEF 等電點電泳系統 IEF Optimizer 適用於市面上所有等電點電泳系統，不論是 GE IPGphor 3 和 Bio-rad Protean IEF System，都可以藉由 IEF Optimizer 增加二維電泳成功率及再現性。 2.介紹 2.1 二維膠體電泳技術 隨著二維膠體電泳技術發展至今，目前已被廣泛應用在許多的科學研究領域。在新藥開發領 域上，二維膠體電泳被用於觀察藥物對於細胞代謝生理影響，成為評估藥物一個重要依據。 另外在疾病的預防或是診斷上面，二維膠體電泳可以提供尋找與疾病相關生物標的物，並提 供患者所需的正確治療。 二維膠體電泳原理如圖.A 所示，分別由兩個部分進行，第一維電泳 (Isoelectric Focusining, IEF)和第二維的 SDS 聚丙烯醯胺膠體電泳(SDS polyacrylamide electrophoresis, SDS)。第一維膠體電泳主要利用蛋白質等電點時不同 pI 值進行分離，不同蛋白質其 等電點的 pH 值亦不同，當施予蛋白質高電壓時，蛋白質會因所帶電荷不同在膠條 (Strip) 內 移動，而當蛋白質達到等電點 pH 位置，蛋白質淨電荷改變為零，蛋白質將無法繼續泳動， 停留在此位置。當第一維電泳完成後，將已進行第一維電泳膠條進行第二維電泳再度利用 SDS將蛋白質依據不同分子量大小分離，而膠體內可分離出不同大大小小蛋白質點。 2 IEF Optimizer pH3 + pH10 + - pH3 pH10 + - pH3 pH10 - + - pH3 pH10 IEF等電點電泳 (依 pI 值分離) SDS(依分子量分離) 圖.A IEF 等電點電泳 及 SDS原理圖。說明: 左為 IEF 等電點電泳原理，當膠體 pH值和 蛋白質 pI 值不同時，蛋白質帶電往相對 pI 值位置移動，而當膠體 pH值和蛋白質 pI 值相同 時，蛋白質不帶電而停留不移動；右為 SDS原理，SDS膠體內有固定孔徑，分 子量大蛋白質因孔徑造成移動速率緩慢則移動距離短，反之，分子量小蛋白質移動速率快則 移動距離長，利用蛋白質在膠體內移動速率不同將蛋白質分離。 2.2 二維膠體電泳常見問題