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4.遗传印记的特点 遗传印记遍布基因组 印记基因的内含子小，雄性印记基因重组率高于雌性印记基因 印记基因表达具有组织特异性 印记基因在世代传递中可以逆转 第32页/共49页 5.印记基因的调控方式 母源等位基因簇 E.g. H19 的基因印记簇 采用ncRNA介导的沉默机制 父源等位基因簇 E.g. Igf2 的基因印记簇 采用基于绝缘子的沉默机制 第33页/共49页 第34页/共49页 第35页/共49页 1961年M.F.Lyon就提出了关于雌性哺乳动物体细胞的两条X染色体中会有一条发生随机失活的假说，并认为这是一种基因剂量补偿的机制。 1996年G.D.Penny等发现X染色体的Xq13.3区段有一个X失活中心( X-inaction center，Xic)，X-失活从Xic区段开始启动，然后扩展到整条染色体。 第36页/共49页 1.失活X染色体特点： 组蛋白H4不被乙酰化 CpG岛的高度甲基化 第37页/共49页 2.X染色体失活过程（起始阶段） 两条染色体都表达不稳定的Xist RNA 第38页/共49页 X染色体失活过程（进展阶段） 其中一条X染色体表达的Xist RNA包裹自身并启动异染色质化过程 第39页/共49页 X染色体失活过程（终末阶段） 活性X染色体停止表达不稳定的Xist RNA，已有的Xist RNA很快降解。 第40页/共49页 第41页/共49页 近几年，哺乳动物克隆取得较大进展，体细胞克隆已在多种哺乳动物获得成功，但成功率仍很低，面临着许多问题：重构胚难以植入子宫、流产率高、胎盘过大、出生个体体重过重、许多个体有呼吸循环系统疾病等。 这些异常表型的高发性和穿越种间的相似性说明：这些问题主要不是由遗传信息的改变引起的而是由外遗传信息的改变导致的，其主要原因就是基因没有获得正确的重新编程。 第42页/共49页 1.配子发生和胚胎发育中的甲基化现象 甲基化状态在分化的体细胞上是稳定和可遗传的，但在哺乳动物中至少有两个时期，一个是配子发生期，另一个是胚胎期，基因组的甲基化状态发生广泛的重新编程。 第43页/共49页 （1）配子发生中的甲基化现象 在小鼠，全局性的去甲基化发生在原始生殖细胞(PGC, primordial germ cells)发育早期。一旦PGC去甲基化，雄性生殖细胞的有丝分裂和雌性生殖细胞的减数分裂都将停止。 几天后，雄性生殖细胞开始再甲基化，再甲基化将有助于生殖细胞有丝分裂的重新开始及随后的减数分裂 。 雌性生殖细胞的再甲基化则发生在出生后卵的生长期，Dnmt3A/3B是可能的参与者，但不确定。 第44页/共49页 （2）胚胎发育中的甲基化现象 在胚胎期，同样发生全局性的去甲基化和再甲基化过程。当精子进入卵子，在精子DNA未复制之前，精子基因组就已发生广泛的去甲基化。 因为细胞核中没有Dnmtl，卵子的基因组则经过一个被动去甲基化过程，直至桑椹胚。 当囊胚植入子宫后，立即发生由Dnmt3A/3B介导的从头甲基化，但仅作用在内细胞团(inner cellmass)，滋养外胚层不被从头合成甲基化 ，此时需别的外遗传标记使基因组序列被甲基化或不被甲基化。 第45页/共49页 2.配子发生和胚胎发育中的遗传印迹现象 印记基因的“印记”形成于配子发育晚期，并且独立于胚胎发育中的全局性去甲基化作用和甲基化作用； 在配子发生晚期，将建立印记基因亲本特异的甲基化标志，若此标志一旦丢失，除非经过生殖系(germ line)的传递，否则将不可能再次获得。 胚胎期，在精子进入卵子时发生的主动去甲基化中，一些父系表达的印迹基因将受保护不被去甲基化。 第46页/共49页 3.哺乳动物克隆过程中的基因重新编程 哺乳动物克隆过程中基因的重新编程有其显著的特殊性，最主要在于它没有经过配子发生这一阶段，重新编程必须在供核进入卵子和重构胚基因组开始转录这一短暂阶段发生。 重新编程后有3种结果：(1)没有得到重新编程，克隆胚胎立即死亡；(2)部分重新编程，将导致各种异常表型和(或)死于发育的各个阶段；(3)正确重新编程，产生正常克隆动物。 第47页/共49页 第48页/共49页 第49页/共49页 * 细胞内引入异体DNA后所合成的多肽链往往不能正确折叠成为有生物活性的蛋白质而形成不溶解的包含体或被降解的新生肽链折叠问题。这一“瓶颈”问题的彻底限制了蛋白质临床治疗应用。克隆羊多利的问题 * 补充了“中心法则”忽略的两个问题，即哪些因素决定了基因的正常转录和翻译以及核酸并不是遗传信息的唯一载体。 * * 受困于经典的分子生物学理论，现代遗传学的发展曾经受到极大的阻碍 第1页/共49页 表观遗传学的出现修补了经典理论，开创了遗传学研究的新局面 第2页/共49页 当前，表观遗传学研究的强度大大