空间记忆的水迷宫实验.pptVIP

空间学习的水迷宫实验 神经生物教研室 王丹 背景 Morris水迷宫(MWM)是英国心理学家Morris于20世纪80年代初设计运用水迷宫测试来研究干预因素对大鼠学习、记忆和空间定向及认知能力的影响, 这一方法设备简易, 操作易学, 得到世界各国从事认知领域研究的科学家的推广和应用。 原理 经典的Morris 水迷宫所检测的是大鼠或小鼠在多次的训练中, 学会寻找固定位置的隐蔽平台, 形成稳定的空间位置认知, 这种空间认知是加工空间信息(外部线索) 形成的。平台的位置与大鼠自身所处的位置和状态无关, 是一种以异我为参照点的参考认知(allocentric cognition) , 所形成的记忆是一种空间参考记忆( reference memory) 。 回顾 非陈述记忆： 非陈述性记忆: 是有关如何操作某件事情的能力的记忆。它有些记忆的内容是在无意识参与的情况下建立的，又叫内隐性记忆 . 陈述记忆：是有关事实、事件情景以及它们相互关系的记忆，这种记忆能够用语言来描述，被称为陈述性记忆。这种记忆可以有意识地回忆，又叫外显性记忆 长时记忆 主要用途和应用领域 Morris水迷宫实验是一种强迫实验动物（大鼠、小鼠）游泳，学习寻找隐藏在水中平台的一种实验，主要用于测试实验动物对空间位置感和方向感（空间定位）的学习记忆能力。被广泛应用于学习记忆、老年痴呆、海马/外海马研究、智力与衰老、新药开发/筛选/评价、药理学、神经生物学等多个学科，在世界上已经得到广泛地认可，是医学院校开展行为学研究尤其是学习与记忆研究的首选经典实验。 实验装置 软件系统： 提供离线分析（后处理）功能，可定时录制视频图象，以多种方式显示指标，提供轨迹图和指标结果的导出功能。 硬件系统包括： 计算机 枪式摄像机 图像采集卡; 圆柱形水池  J.J. Buccafusco. Methods of Behavior Analysis in Neuroscience. 2001 实验装置 大鼠： 160cm内径，高55cm，站台直径9~12cm（直径可调）； 小鼠：120cm内径，高50cm，站台直径6~9cm（直径可调），高度升降范围20~35cm（高度可调）, 一般以池底圆心为中心将迷宫划分为四个象限，将一平台置于某一象限中心，迷宫上方安置与电脑系统相连接的摄像机，可同步记录大鼠运动轨迹及寻找平台潜伏期等，实验期间迷宫外参照物及平台位置保持不变。实验时在池壁选择四个入水点，相邻两个入水点间距离不小于25cm，向池内加自来水，实验鼠为白色选择黑色背景水池，实验鼠黑色选择白色背景水池，水面约高于平台面2cm，水温保持在25℃左右。 实验设计整体思路 数据处理 测试 训练 造模 检测Aβ寡聚体注射的大鼠AD模型 阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease, AD)也称老年痴呆症, 是发生在老年人的一种中枢神经系统退行性疾病. 临床表现为进行性记忆力丧失、认知功能减退以及人格改变， 该病的典型病理特征是在大脑皮质和海马区域的细胞外出现以β-淀粉样蛋白(beta-amyloid, Aβ)为核心的老年斑(Senile Plaque, SP)、 细胞内神经原纤维缠结(Neurofibrillary Tangle, NFT)等病变。 Aβ 是老年斑的核心成分, 在 AD 的发病机制中具有关键作用,以往的研究认为只有聚合成纤维形式的Aβ对神经元具有毒性作用, 因此, 在应用 Aβ 制作 AD动物模型时, 均采用不溶性的纤维型 Aβ 聚集物制 作模型.近几年的研究发现, Aβ 寡聚体的神经毒性要比 Aβ 纤维的毒性大得多，因而有关可溶性 Aβ 寡聚体的神经毒性作用日益被重视。为此, 研究探讨建立与人类 AD早期发病机制相似的、较理想的新型AD动物模型的成为可能。 Aβ寡聚体注射大鼠AD模型的建立 实验动物及分组 250~300 g 健康 SD 大鼠 34 只, 动物随机分成3组: 分组 数量 处理方式 正常组 10只 不做任何处理 对照组 12 只 海马区注射生理盐水 AD 模型组 12 只 海马区注射 Aβ 寡聚体 Aβ寡聚体注射大鼠AD模型的建立 AD模型组大鼠：给SD大鼠双侧海马CA1区定向注射，用微量注射针在两侧分别缓慢推注 5 μL Aβ 寡聚体, 对照组注射等量生理盐水, 注射时间持续10min, 留针5min, 每天推注 1 次, 连续 3 次. 术后单笼饲养. 各组大鼠分别在术后第 2 周和第4周开始水迷宫检测. 实验方法 Morris水迷宫泳池注水(水温25±2 ℃) ，放置逃生平台（平台