分子生物学 总结---DNA复制.docVIP

  原核生物真核生物过程酶或蛋白作用酶或蛋白作用DNA双螺旋的解旋DNA解链酶（DNA helicase）水解ATP获得能量来解开双链DNA，大部分可沿后随链模板5’→3’方向随复制叉前进而移动，Rep蛋白是沿前导链模板的3’→5’方向。单链结合蛋白（SSB）保持单链的存在，无解链作用。原核生物SSB蛋白与DNA结合表现出协同效应。DNA拓扑异构酶（DNA topoisomerase）消除解链造成的正超螺旋的堆积，消除阻碍解链继续进行的这种压力，使复制得以延伸。DNA复制的引发及链延伸引发酶一种特殊的RNA聚合酶，在DNA模板上合成一段RNA链，提供引发末端（即引物，prime）。起始点识别复合物ORC由6种蛋白质组成的启动复合物。ORC与自主复制序列（ARS）结合。引发体（primosome）针对后随链。引发前体+6种蛋白质（n,n’,n’’,DnaB/C/I）+引发酶。引发酶是dnaG基因的产物，是特定环境下发挥作用的RNA聚合酶。DNA聚合酶α引物合成，以复合体(DNA聚合酶α/引发酶)的形式存在，具有引发、延伸链的双重功能。又称为pol α的引发酶。RNase H降解RNA引物DNA聚合酶δ延伸前导链DNA聚合酶Ⅰ补齐冈崎片段缺口DNA聚合酶δ/ε合成后随链冈崎片段DNA连接酶连接相邻冈崎片段RNA酶H1在靠近RNA与DNA连接处切开引物DNA聚合酶Ⅲ链延长反应的主导聚合酶FEN1蛋白具5’→3’核酸外切酶活性，降解RNA片段DNA连接酶Ⅰ连接相邻冈崎片段复制的终止Tus蛋白重复终止序列Ter与Tus蛋白形成复合物Ter-Tus。Ter-Tus能使DnaB不再将DNA解链，阻挡复制叉的继续前移，等到相反方向的复制叉到达后停止复制，其间仍有50~100bp未被复制，由修补方式填补空缺，然后两条链解开。端粒酶前导链可连续复制直到模板链的末端，释放出完整子代染色单体。 通过端粒结构和端???酶来防止DNA复制时后随链缩短产生的染色体的部分缺失。 端粒酶具反转录酶活性，利用自身携带的RNA链作为模板，以dNTP为原料，以反转录方式催化合成模板后随链5’端DNA片段或外加重复单元，以维持端粒的一定长度，从而防止染色体的缺短损伤。DNA拓扑异构酶Ⅳ使复制叉解体，释放子链DNA。 ★目前已知的DNA聚合酶都只能延长已存在的DNA链，而不能从头合成DNA链。 ★凡能从多核苷酸链的末端开始水解核酸的酶称为核酸外切酶,凡能从多核苷酸链中间开始水解核酸的酶称为核酸内切酶。而能识别特定的核苷酸顺序,并从特定位点水解核酸的内切酶称为限制性核酸内切酶(限制酶）。 ★起始位点：真核生物每条染色体上面可以有多处，而原核生物已有一个起始点。 真核生物的染色体在全部完成复制之前，各个起始点上DNA的复制不能再开始，而在快速生长的原核生物中，复制起点上可以连续开始新的DNA复制，表现为虽只有一个起始位点，但有多个复制叉。 ★DNA半保留复制：（semiconservative replication）DNA在复制过程中，每条链分别作为模板合成新链，产生互补的两条链。这样新形成的两个DNA分子与原来的DNA分子的碱基顺序是完全一样的。因此，每个子代分子的一条链来自亲代DNA，另一条链则是新合成的，这种复制方式即为semiconservation replication。由Watson and Crick 提出，由Meselson and Stahl通过经15N标记3个世代的大肠杆菌DNA实验得以验证， ★DNA半不连续复制：（semi-discontinuous replication）：DNA复制过程中，前导链的复制是连续的，而后随链的复制是中断的、不连续的。 ★冈崎片段（Okazaki fragment）：是DNA半不连续复制中产生的长度为1000~2000个碱基的短的DNA片段，能被连接形成一条完整的DNA链。 ★复制子（replicon）：单独复制的一个DNA单元被称为一个复制子，它是一个可移动的单元。一个复制子在任何细胞周期只复制一次。 ★复制叉（replication fork）：复制时，双链DNA要解开成两股链分别进行DNA结合，所以，复制起点呈叉子形状，被称为复制叉。 ★引发酶（primase）：是依赖于DNA的RNA聚合酶，其功能是在DNA复制过程中合成RNA引物。 ★引发体（primsome）：DNA复制过程中引发合成每个冈崎片段时所需的多蛋白复合物，包括预引发蛋白、具有ATP酶活性的蛋白质以及引物酶。引发体与DNA结合后由