反义RNA抑制c-myc表达增强骨肉瘤细胞对顺铂的-第三军医大学学报.DOCVIP

反义RNA抑制c-myc表达增强骨肉瘤细胞对顺铂的敏感性 摘要目的：通过对骨肉瘤细胞MG-63和U2OS c-myc基因干扰，初步探讨顺铂对c-myc低表达骨肉瘤细胞凋亡的影响。方法：以腺病毒为载体，构建表达反义c-myc的重组腺病毒（Ad-Asc-myc），并在体外感染骨肉瘤细胞MG-63和U2OS，与不同浓度及不同时间点的顺铂作用后，采用蛋白免疫印迹（Western blot）方法检测干扰水平；瑞氏染色和MTT检测顺铂对骨肉瘤细胞MG-63和U2OS凋亡作用。结果：构建包装的腺病毒Ad-Asc-myc体外感染MG-63和U2OS 48h后，可明显降低c-myc蛋白表达；随着顺铂浓度和处理时间增加可增强对细胞增殖的抑制。论：抑制c-myc的表达可以增强骨肉瘤对化疗的敏感性。 关键词反义c-myc；骨肉瘤；顺铂；细胞凋亡 Antisense c-myc sensitizes osteosarcoma cells to cisplatin-induced apoptosis Li Hongwei1，Ye Kaishan2，Wu Zhuo1，Wang Shuanke2 (1Lanzhou University Second Hospitalspital ，Lanzhou，730000；2Lanzhou University Second Hospitalspital；Orthopaedics key Laboratory of Gansu Province，Lanzhou，730000，China) [Abstract] Objective: To investigated whether down-regulation of c-myc through antisense RNA could increase the sensitivity of osteosarcoma MG-63 and U2OS cells to cisplatin -induced apoptosis. Methods: The recombinant adenovirus (Ad-Asc-myc) encoding antisese c-myc fragment was constructed and infected into osteosarcoma cells MG-63 and U2OS. The expression of c-myc was analyzed by quantitative real-time PCR and Western blot. The change in the sensitivity to cisplain-induced apoptosis was assayed by MTT, the shape of osteosarcoma cells was observed by Wrights staining. Results: Ad-Asc-my down-regulated the expression of c-myc after infected MG-63 and U2OS for 48h, which resulted in increased inhibition of cell proliferation by cisplatin in a dose- and time-dependent manner. Conclusion: Reducing c-myc level could increase the chemotherapy sensitivity of osteosarcoma. [Key words] Antisense c-myc；Osteosarcoma； Cisplatin； Apoptosis 原癌基因c-myc 作为myc基因家族的重要成员，在所有细胞中都有一定表达，其在细胞的增殖分化以及凋亡中发挥重要作用，但是当c-myc基因被激活后，会导致细胞发生恶性转化、不受限制的增殖，与肿瘤发生密切相关[1,2]。骨肉瘤是一种恶性程度非常高的肿瘤，在不同的骨肉瘤细胞株中c-myc表达显著增高[3]。临床研究表明，c-myc高表达大鼠模型诱导产生的骨肉瘤可通过降低c-myc的表达而明显抑制肿瘤的生长，并增强化疗药物诱导凋亡的作用[4,5]。因此，以c-myc作为骨肉瘤治疗靶点，降低不同种类骨肉瘤细胞中c-myc基因表达，是否有利于提高治疗效果？对此，本研究通过构建反义重组腺病毒，并感染人骨肉瘤细胞MG-63和U2OS，检测顺铂化疗的效果。 材料与方法 1 材料 1.1 主要试剂 复制缺陷型5型重组腺病毒载体系统（AdeasyTM） 限制性核酸内切酶、T4 DNA链接酶，总R