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动物病毒培养----鸡胚接种 一、目的要求： 1、掌握鸡胚接种途径和接种方法。 2、了解新城疫病毒在鸡胚尿囊腔的增值过 程，接毒和收毒的方法。 3、掌握HA和HI的基本操作技术，了解实用价 值。 动物病毒培养：可在自然宿主、实验动物、鸡胚或细胞培养中进行，以死亡、发病或病变等作为病毒繁殖的直接指标。  鸡胚培养是培养某些病毒常用方法,此方法可用于某些病毒的分离、增殖、毒力滴定、中和试验及生产疫苗等。 病毒接种鸡胚的途径：有多种，主要有卵黄囊接种、绒毛尿囊腔接种、绒毛尿囊膜接种、羊膜腔接种途径等。 应根据需要选择适当的途径。 鸡胚的日龄根据接种途径和接种材料而定。  （1）卵黄囊接种，选用6～8日龄的鸡胚； （2）绒毛尿囊腔接种，用9～10? 龄鸡胚； （3）绒毛尿囊膜接种，用9～13日龄的鸡胚。 鸡胚结构图 二、器材及试剂:病毒：鸡新城疫病毒弱毒疫苗； 鸡胚：9-11日龄白壳受精卵；孵卵箱、检卵灯、三棱针、注射器、2.5%碘酒棉、75%酒精棉、固体石蜡、眼科剪、眼科镊等。 【接种后检查】 接种后24h内死亡的鸡胚，系由于接种时鸡胚受损或其他原因而死亡，应该弃去，24h后，每天照蛋2次，如发现鸡胚死亡立即放人冰箱，于一定时间内不能致死的鸡胚亦放入冰箱冻死。死亡的鸡胚置冰箱中1-2h即可取出收取材料并检查鸡胚病变。 血凝及血凝抑制试验 ------鸡新城疫 一、目的 二、实验材料： 1 、96孔V形微量反应板，50微升定量加样器,Tip 。 新城疫病毒液、1%鸡红细胞、生理盐水、新城疫抗体。 2、1%鸡红细胞：抗凝采取健康鸡血，离心法用生理盐水反复洗涤4次，最后一次的压迹红细胞与生理盐水配制而成。 加样器 加样器 酶标板 96孔血凝板 二、原理 血凝实验 (hemagglutinin test, HA) 第6排，第7---9孔为全凝集 原理 血凝抑制实验 （hemagglutinin inhibition test, HI) 抗体抑制效价： ＝凝集价÷抑制价 ×抗体稀释度 四、思考题　　 消毒： 本期兽医微生物实验课程结束，希望同学们真正学到了实验技术，好好复习，并考出好成绩。 C型： U型： V型： 病毒表面血凝素与鸡红细胞表面糖蛋白受体发生 结合而发生凝集。 检测病毒的存在，滴定病毒的血凝效价，大致估计 病毒颗粒的数量 (1个血凝单位＝106病毒颗粒) 特异性抗体与相应病毒结合，使病毒失去凝集红细胞的能力， 从而抑制血凝现象。 检测血清中是否存在抗体及抗体的效价（含量） 对病毒进行分型（鉴定）。 Method: 弃50ul Tubes 1 2 3 4 5 6 7… 10 对照 对照 NS 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 HA 50 50 50 50 50 50 50 50 50 - (2×) (4×) (8×) (16×) (32×) (64×) … NS 50 50 50 50 50 50 50 50