动物生物化学绪论第一章 核酸与蛋白化学课件.pptVIP

2、核酸的复性（Renaturation） 变性DNA在适当的条件下，两条彼此分开的单链可以重新缔合成为双螺旋结构，这一过程称为复性。DNA复性后，一系列物理、化学性质将得到恢复。DNA复性的程度、速率与复性过程的条件有关。 将热变性的DNA骤然冷却至低温时，DNA不可能复性。但是将变性的DNA缓慢冷却时，可以复性，这一过程也叫退火（annealing)。分子量越大复性越难。浓度越大，复性越容易。此外，DNA的复性也与它本身的组成和结构有关。 复性反应的速度用Cot1/2衡量。Co为变性DNA复性时的浓度，t为时间，以秒表示。 Cot1/2衡量表示复性一半时的Cot值。 3、核酸的分子杂交（ hybridization） 将不同来源的DNA放在试管里，经热变性后，慢慢冷却，让其复性。若这些异源DNA在某些区断内有相同的序列，则复性时，会形成杂交DNA分子，且DNA与互补的RNA之间也可发生杂交。 Southern印迹杂交（Southern blot）。是研究DNA图谱的基本技术，在遗传病诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。Southern印迹杂交的基本方法是将DNA标本用限制性内切酶消化后，经琼脂糖凝胶电泳分离各酶解片段，然后经碱变性，Tris缓冲液中和和高盐下通过毛吸作用将DNA从凝胶中转印至硝酸纤维素膜上、烘干固定后即可用于杂交。凝胶中DNA片段的相对位置在DNA片段转移到滤膜的过程中继续保持着，附着在滤膜上的DNA与32P标记的探针杂交，利用放射自显影术确立探针互补的每一条DNA带的位置，从而可以确定在众多消化产物中含某一特定序列的DNA片段的位置和大小。 Northern印迹杂交（Northern blot）。这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。因RNA印迹技术正好与DNA相对应，故被称为Northern印迹杂交。Northern　印迹杂交的RNA吸印与Southern印迹杂交的DNA吸印方法类似，只是在进样前用乙二醛或甲醛使RNA变性，而不用NaOH，因为它会水解RNA的2-羟基基团。 基因芯片（gene chip）是指将现代探针固相原位合成技术、照相平板印刷技术、高分子合成技术等微电子技术与分子生物学技术（如核酸杂交技术、PCR等）相结合，在一定狭小的空间内实现高速度、高通量、集约化和低成本的基因分析技术。它利用核酸双链的互补碱基之间的氢键作用，形成稳定的双链结构，通过检测目的单链上的荧光信号，从而达到一次试验同时检测多种疾病或分析多种生物样品的目的。目前，比较成熟的产品有检测基因突变的芯片，检测细胞基因表达水平的表达基因芯片等。 1.病毒 头部 颈圈 尾部 基板 尾丝 尖钉 噬菌体T2结构 病毒核酸位于头部，由蛋白质（衣壳）包裹。 动物病毒切面模式图 被膜（脂蛋白、碳水化合物） 衣壳（蛋白质） 核酸 突起（糖蛋白） 病毒粒 细菌虽然没有真核细胞的核结构，但其遗传物质也不是完全散开的，细菌的染色体在细胞内紧密缠绕形成致密的小体称为拟核（nucleoid ）。 DNA-蛋白质核心 平均一个突环含有约40kpDNA 2.细菌的拟核 细菌的基因组为双链环状DNA，其上结合碱性蛋白和少量RNA，形成许多突环。 3.DNA在真核生物细胞核内的组装 染色质的基本结构单位是核小体(nucleosome)，它由8个组蛋白核心和外绕1.8圈的DNA所组成。由核小体链形成纤丝，进而折叠、螺旋化，组装成不同层次结构的染色质和染色体。 核小体由DNA和组蛋白构成 DNA：以负超螺旋缠绕在组蛋白上 组蛋白核心：（H2B ,H2A ,H3 ,H4）2 H1组蛋白在核小体之间 DNA的存在形式 真核生物染色体DNA组装不同层次的结构 DNA （2nm） 核小体链（ 11nm，每个核小体200bp） 纤丝（ 30nm，每圈6个核小体） 突环（ 150nm，每个突环大约75000bp） 玫瑰花结（ 300nm ，6个突环） 螺旋圈（ 700nm，每圈30个玫瑰花） 染色体（ 1400nm， 每个染色体含10个螺旋圈) 第三节 核酸的理化性质 核酸的理化性质——一般物理性质 DNA为白色纤维状固体，RNA为白色粉末状固体。 都微溶于水，其钠盐在水中的溶解度较大。但不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般有机溶剂。 DNA和RNA在细胞中常以核酸—蛋白复合体（核蛋白）形式存在，两种核蛋白在盐溶液中的溶解度不同。 DNA核蛋白 RNA核蛋白 0.14mol/LNaCl - + 1-2mol/LNaCl + -