微生物自来水中细菌测定.doc

自来水中细菌总数的测定 姓名： 指导老师：陈燕飞 （太原师范学院 生物系 生物科学 02班 学号：200131201） 摘 要 本实验应用平板菌落技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌种数仅是一种近似值。目前一般采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在保证无菌的环境下，采取自来水的样品，利用培养基制作平板，计数。按菌落计数方法进行计数，通过实验测得的菌数对照国家饮用水标准来判断水质。我国饮用水卫生标准（GB5749-85）规定每毫升水样细菌总数37℃培养24h不得大于100个。自来水的微生物学检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义/mL，不符合国家饮用水标准。 关键词：自来水 细菌 平板菌落计数技术 引：水是微生物广泛分布的天然环境。各种天然水中常含一定数量的微生物。水中微生物的主要来源是：水中的水生性微生物（如光合藻类）、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。水中的病原菌主要来自于人和动物的传染性排泄物。自来水指通过水处理厂净化、消毒后生产出来的符合国家饮用水标准的供人们生活、生产使用的水必须符合国家生活饮用水卫生标准1］。细菌总数是指水样在一定条件下培养后（培养基成分，培养温度和时间、pH、需氧性质等）所得1mL水样所含菌落的总数。本实验只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数。 应用平板计数技术测定水中细菌总数是用微生物测水质的常用方法。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。通过此方法我们能够计算出水中的细菌总数，从而判断自来水是否符合国家标准，是否受到污染。3个，细菌总数每毫升不超过100个［3］。 1 材料与方法 本次实验于201年1月—4日在太原师范学院南校区微生物学实验室进行。 1.1 材料、试剂与仪器 实验材料 自来水 实验试剂 牛肉膏 蛋白胨 NaCl 1mol/LNaOH 1mol/LHCl 灭菌水 实验仪器 高压蒸气灭菌锅 培养皿 三角烧瓶 天平 牛角匙 pH试纸（pH5.5-9.0） 吸量管 麻绳 牛皮纸 量筒 玻璃棒 电炉 温度计 1.2 实验方法 1.2.1灭菌首先将高压蒸气灭菌锅的内锅层取出,再向外锅内加入适量的水,使水面与三角搁架相平为宜。 放回内层锅,并加入用报纸包好的培养皿、三角烧瓶、。 加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺旋，使螺旋松紧一致，勿使漏气。 用电炉加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅内压力上升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用0.1MPa,121℃,20min灭菌。 灭菌时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时打开排气阀，旋松螺旋，打开盖子，取出灭菌物品。 1.2.2水样的采取 放开水龙头使水流5min后，用已灭菌的三角烧瓶接取水样，以待分析。 1.2.3制备牛肉膏蛋白胨培养基 称量牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下： 牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 水 1000mL pH 7.4～7.6 按培养基配方依次准确的称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl放入烧杯中。牛肉膏常用玻璃棒挑取，放在称量纸上，称量后直接放入水中，稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。 溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将称好的琼脂放入已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。 调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.6。反之，用1mol/L HCl进行调节。 1.2.4细菌总数测定 灭菌吸管吸取1mL水样，注入其中一套灭菌的培养皿中。共做两个平皿。 分别倾注约15mL已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使自来水和培养基混匀。 另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基15mL，作空白对照。 待培养