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独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。尽我所知,除文中已经标明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体,均 已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名: 日期:年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借 阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行 检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□,在年解密后适用本授权书。 本论文属于不保密□。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名:指导教师签名:日期:年月日日期:年月日aPKC-ι 作为人类肝癌治疗新靶点的实验研究1引言原发性肝癌,尤其是肝细胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)是我国 和亚非地区常见的一种高度恶性的肿瘤。根据亚太地区肝癌预防工作组(Asia-Pacific Working Party on Prevention of Hepatocellular Carcinoma)的资料[1],我国 2000 年至 2005 年的肝癌年总发病率约为 26-32/100 000 人,东南地区甚至高达70-80/100 000 人。尽管对肝癌的诊断和治疗取得了一定进展,但 90 年代后肝癌 的死亡率仍高达 10-15/100 000 人,居亚太地区肿瘤死亡率第三位。肿瘤的侵袭 转移是肝癌呈现高发病率及高死亡率的主要原因,肝癌的术后转移率高达 75%[2]。因此,研究肝癌细胞侵袭转移的分子机制,寻找出早期控制肝癌侵袭转 移的途径就成为防治肝癌的关键。肿瘤侵袭转移是一个复杂的生物学过程。在此过程中,癌细胞向邻近组织侵 袭性生长是肿瘤转移的起始步骤,其核心环节是癌细胞的上皮细胞-间质细胞转 化(Epithelial-Mesenchymal transition,EMT)和极化重建[3],即癌细胞失去与邻 近细胞间的粘附,从而失去上皮细胞特有的细胞间紧密连接,造成癌细胞形态改 变导致 EMT。在此基础上,进一步建立起有利于癌细胞移动的再极化状态(repolarization),形成包括细胞骨架重排、粘附蛋白和高尔基体在细胞内的重新 分布等有利于细胞移动的极化状态,以提供癌细胞伪足移动的动力,从而启动癌 细胞的侵袭转移[4-6]。因此,研究上述癌细胞极化状态的调控成为理解癌细胞早 期侵袭转移机制的核心问题。多种信号通路参与了癌细胞的 EMT 及极化重建, 包括 TGFβ/Smad、整合素相关激酶(ILK)、Wnt/β-catenin 信号通路[7]、上皮生长 因子(EGF)、纤维母细胞生长因子(FGF)和肝细胞生长因子(HGF)[8]等。最 近有研究发现蛋白激酶 C (PKC)信号通路也参与了肿瘤细胞的上皮细胞-间质细胞转化及极化重建。蛋白激酶 C(PKC)家族作为许多信号传导通路的枢纽,在多种细胞进程中 起着重要的调节作用,包括细胞增殖、细胞周期控制、细胞分化、细胞生存和极 性建立[9, 10]。已经有报道,由 PKCs 组织特异性表达及活性改变诱导的上述细胞 进程失调与某些疾病的发生有关[11]。自从发现 PKCs 是肿瘤促进因子佛波醇酯(phorbol esters)的细胞受体后[12, 13],预示 PKCs 在肿瘤进展中的许多方面起着重要作用。有文献报导,在体内及体外实验中证明非典型蛋白激酶 C-iot(aaPKC-ι)直接参与肿瘤发生过程[14-17]。aPKC-ι 在人类慢性髓细胞白血病(CML)细胞 K562 中高度表达,且在实验中通过表达 aPKC-ι 特异性反义结构或激酶活性缺陷的 aPKC-ι 突变体(kdPKC-ι)可阻遏细胞恶性转化,从而使细胞对化疗诱导的细胞 凋亡敏感性增强[15]。aPKC-ι 也可促进体内及体外结肠肿瘤的发生[16],在 AOM(Azoxymethane)诱导的大鼠结肠肿瘤和人类结肠癌组织中均有 aPKC-ι 高表达。 与暴露于 AOM 的非转基因同窝鼠相比,结肠上皮细胞持续高表达激活型 aPKC-ι(caPKC-ι)的转基因鼠可见更多的结肠癌癌前病变及异常隐窝灶(Aberrant Crypt Foci,ACF)。与此相反,结肠上皮 kdPKC-ι 高表达的转基因大鼠则很少有结肠 异常隐窝病灶[16]。ACF 中含有许多与结肠肿瘤相同的遗传学及生物化学改变, 如 PKCβⅡ表达增高[18]、K-Ras 激活突变[19]等,故 ACF 很可能是大鼠和人类结 肠癌的前兆[20, 21
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