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优秀毕业论文 精品参考文献资料 ARHI ARHI 基因对卵巢癌细胞的作用及作用机制研究 中文摘要 中文摘要ARH 中文摘要 ARHI 基因对卵巢癌细胞的作用及作用机制研究 I I PAGE PAGE 3 ARHI 基因对卵巢癌细胞的作用及作用机制研究 中文摘要 研究目的：肿瘤的发生伴随着癌基因的激活或者抑癌基因的失活，研究这些基因 的功能，有助于肿瘤的靶向治疗。ARHI 是母源性肿瘤抑制印迹基因，在卵巢癌中失 表达。本课题研究卵巢癌细胞过表达 ARHI 对细胞增殖的抑制作用及机制。 方法：本研究以质粒 pcDNA3.0-ARHI 为模板 PCR 扩增 ARHI 基因编码序列，获 得重组质粒所需目的基因，选用 pIRES2-EGFP 质粒为载体，通过 EcoRI 和 BamHI 双酶切及 T4 连接酶连接方法把扩增的目的基因插入到真核生物载体 pIRES2-EGFP 的 MCS 区，两者的粘性末端连接，并后续完成构建后酶切、电泳及测序鉴定。QPCR 法检测不同卵巢癌细胞株中 ARHI 基因的表达情况，将 pIRES2-EGFP-ARHI 重组质 粒 转 染 至 ARHI 基 因 低 表 达 的 人 卵 巢 癌 细 胞 内 实 现 ARHI 基 因 表 达 ， 并 设 立 pIRES2-EGFP 空 载 体 转 染 组 和 未 转 染 组 细 胞 作 为 对 照 ， CCK-8 法 检 测 pIRES2-EGFP-ARHI 重组质粒表达对转染细胞的生长抑制率，流式细胞仪分析细胞周 期分布并检测细胞凋亡率，并用 Western blotting 检测微管相关蛋白轻链Ⅱ（LC3-Ⅱ）、 细胞内 MAPK/ERK1/2 及 JAK-STAT3 信号转导通路功能蛋白 P-ERK 和 P-STAT3 的 表达水平变化。 结果：QPCR 结果显示所检测卵巢癌细胞均出现不同程度的 ARHI 失表达， SKOV3 细胞在所检测卵巢癌细胞株中 ARHI 表达最低。SKOV3 细胞经不同处理后， 实验组细胞培养 24h、48h、72h、96h 及 120h 的生长抑制率分别为 64.69%、70.17%、 67.01%、66.87%、67.70%，均明显高于质粒对照组（P﹤0.01）。培养 48h 时实验组、 质粒对照组、空白对照组 S 期细胞的比例分别为 64.18%、38.43%及 15.15%；凋亡率 分别为 47.97%、26.53%及 9.33%；培养 72h 时实验组、质粒对照组、空白对照组 S 期细胞的比例分别为 43.95%、12.37%及 10.89%；凋亡率分别为 51.34%、20.55%及 4.39%；实验组细胞培养 48h 时 LC3-Ⅱ表达水平增加，而 P-ERK 和 P-STAT3 的表达 水平下降，实验组与对照组间有明显差异。 结论：ARHI基因在卵巢癌中失表达，过表达ARHI基因可以抑制SKOV3细胞生 长，使SKOV3细胞阻滞于S期，诱导细胞凋亡及自体吞噬。可能机制是ARHI抑制了 ERK1/2和STAT3的磷酸化激活，阻断了细胞增殖信号通路，从而诱导的SKOV3细胞 凋亡。 关键词：卵巢癌；ARHI；SKOV3；细胞增殖，细胞凋亡 作 者：孟惠娟 指导老师：胡建铭 ARHI ARHI 基因对卵巢癌细胞的作用及作用机制研究 英文摘要 中文摘要ARH 中文摘要 ARHI 基因对卵巢癌细胞的作用及作用机制研究 III III PAGE PAGE IV The Experimental Study on the mechanism of ARHI gene in ovarian cancer cells Abstract Objective: Tumorigenesis is always companied by activation of oncogenes or inactivation of tumor suppressor genes. Studies on the function of these genes promise great help to targeted therapy of cancer. ARHI is a maternal imprinting tumor suppressor gene, whose function is abrogated in ovarian cancer. Our work aims to investigate the effect of ARHI constructive overexpression on cell proliferation in ovarian cancer cells. Methods: In our study